本文關(guān)鍵詞：抑制Sonic Hedgehog信號(hào)通路對(duì)急性腦梗死大鼠血管再生的影響

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【摘要】：背景和目的 目前,隨著社會(huì)節(jié)奏的變快,飲食結(jié)構(gòu)的改變及缺乏運(yùn)動(dòng)量等因素,腦血管病的發(fā)病率逐年上升,并趨于年輕化,其中缺血性腦血管病(ischemia cerebrovascular disease, ICVD)所占比例明顯增加,成為最為常見的致死、致殘疾病之一,研究發(fā)現(xiàn)ICVD患者中血管密度高者的預(yù)后明顯好于血管密度較低者,也有研究證實(shí),腦梗死區(qū)血管再生程度與Sonic Hedgehog (Shh)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。 Shh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要由信號(hào)肽(Shh、Ihh、Dhh)、細(xì)胞膜表面的跨膜受體(Ptch,Smo)及下游轉(zhuǎn)錄因子(Gli蛋白家族)組成,Shh通路激活后主要通過(guò)Gli1蛋白家族發(fā)揮作用。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)腦梗死后,缺血腦組織中有Shh信號(hào)通路的激活,外源性Shh促進(jìn)腦梗死后血管的再生與重建,增加缺血組織中血流灌注,促進(jìn)神經(jīng)功能的修復(fù),但其機(jī)制尚不明了�；诖�,本實(shí)驗(yàn)用線栓法制作大鼠局灶性永久性腦缺血模型,使用Shh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路特異性抑制劑環(huán)杷明(cyclopamine)觀察不同時(shí)間點(diǎn)大鼠缺血皮質(zhì)區(qū)Shh信號(hào)通路下游分子Gli1、血管再生相關(guān)因子VEGF、hFGF及新生血管標(biāo)記物CD105的表達(dá),探討Shh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)大鼠缺血側(cè)大腦缺血皮質(zhì)區(qū)血管再生的影響及機(jī)制。 材料與方法 線栓法制作大鼠永久性大腦中動(dòng)脈閉塞(Permanent Middle CerebralAretery Occlusion, PMCAO)模型。健康雄性SD大鼠162只(體重280-330g)隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦梗死模型組和環(huán)杷明處理組,每組54只大鼠,每組按照缺血時(shí)間(腦缺血6h、24h、48h)分為三個(gè)亞組,每個(gè)亞組18只大鼠。環(huán)杷明處理組在大鼠缺血即刻以0.18mg/kg的劑量經(jīng)腹腔注射環(huán)杷明,假手術(shù)組和腦梗死模型組在相同時(shí)間以相同劑量和方式給予溶劑。其中每個(gè)亞組分別在大鼠永久性缺血6h、24h、48h后取8只動(dòng)物處死取缺血大腦皮質(zhì)區(qū)腦組織,液氮保存后檢測(cè)Gli1mRNA含量,另取10只心臟灌注,甲醛固定后,取缺血大腦皮質(zhì)區(qū)做石蠟切片。采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)缺血側(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)Gli1mRNA的表達(dá)情況；采用免疫組化法檢測(cè)缺血側(cè)大腦缺血皮質(zhì)區(qū)VEGF、bFGF及CD105的表達(dá)情況。 結(jié)果 (1)缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)域Gli1mRNA的檢測(cè)結(jié)果腦缺血6h后,Gli1的表達(dá)開始升高,并與24h達(dá)到高峰,48h開始降低。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠在腦缺血后6h、24、48hGli1的表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。環(huán)杷明組在腦缺血6h后也出現(xiàn)Gli1的表達(dá)增高,24h達(dá)高峰,48小時(shí)開始下降,但其表達(dá)量與模型組相比明顯低與模型組,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (2)缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)VEGF的檢測(cè)結(jié)果免疫組化結(jié)果可見,棕黃色的顆粒沉積在胞質(zhì)中,此即為VEGF陽(yáng)性表達(dá),VEGF表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞,假手術(shù)組可觀察到微量的VEGF表達(dá)。與假手術(shù)組比較,模型組VEGF蛋白表達(dá)顯著增加,并與24h達(dá)到高峰,48h有所下降,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,環(huán)杷明組VEGF的表達(dá)有所下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (3)缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)bFGF的檢測(cè)結(jié)果免疫組化結(jié)果可見,棕黃色的顆粒沉積在胞質(zhì)中,此即為bFGF陽(yáng)性表達(dá),bFGF可表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞,但是,以神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)為主。假手術(shù)組可觀察到微量的bFGF表達(dá)。與假手術(shù)組比較,模型組bFGF蛋白的表達(dá)顯著增加,并與24h達(dá)到高峰,48h有所下降,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,環(huán)杷明組bFGF的表達(dá)有所下降(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (4)缺血側(cè)皮質(zhì)區(qū)CD105的檢測(cè)結(jié)果免疫組化結(jié)果可見,棕黃色的顆粒沉積在胞質(zhì)中,此即為CD105陽(yáng)性表達(dá),CD105主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá),假手術(shù)組中可見極其微量的CD105的表達(dá)。與假手術(shù)組相比,模型組CD105蛋白表達(dá)顯著增加,6h就有表達(dá),以后從持續(xù)增高直到48h仍未發(fā)現(xiàn)有下降,在一定時(shí)間內(nèi)呈持續(xù)增加,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與模型組比較,環(huán)杷明組CD105的表達(dá)有所下降,在一定時(shí)間里也呈持續(xù)增加趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 (1)給予外源性Shh信號(hào)通路抑制劑環(huán)杷明后可以有效抑制通路下游分子Gli1表達(dá)。 (2)Shh信號(hào)通路與腦缺血后血管再生有密切關(guān)系,抑制Shh信號(hào)通路可下調(diào)腦缺血組織中、(?)EGF、CD105的表達(dá),抑制血管再生。
【關(guān)鍵詞】：Sonic Hedgdhog信號(hào)通路 急性腦梗死 環(huán)杷明 大腦皮質(zhì) Gli1 血管再生 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R743.33
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-24
• 結(jié)果24-29
• 討論29-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 附圖42-48
• 綜述48-62
• 參考文獻(xiàn)58-62
• 英文縮略詞表62-63
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷63-64
• 致謝64

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1081534