本文關(guān)鍵詞：CXCR4轉(zhuǎn)染提高BMSCs在海水淹溺型肺損傷中患肺歸巢的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： CXCR4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 海水淹溺 歸巢

【摘要】：隨著海上運(yùn)輸業(yè)、海濱旅游業(yè)、海水養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展及出海捕魚(yú)等海上活動(dòng)的增加,我國(guó)的海水淹溺人數(shù)逐年增多,同時(shí),海水淹溺也是軍隊(duì)海上訓(xùn)練和作戰(zhàn)的常發(fā)事件。與淡水淹溺相比,由于海水的高滲等特殊理化性質(zhì),其引起的直接損傷及繼發(fā)損傷都更加嚴(yán)重,最終發(fā)展為海水型呼吸窘迫綜合征(Seawater respiratory distress syndrome,SW-RDS),病情兇險(xiǎn),發(fā)展迅速,目前的治療方法是及時(shí)去除病因,盡早對(duì)患肺組織行功能支持如機(jī)械通氣等,但現(xiàn)有的治療效果不盡理想,SW-RDS的病死率仍居高不下。因此,尋求更為有效的治療方法成為目前該領(lǐng)域的熱點(diǎn)。為保障受試者的安全,研究人員不能直接將新的治療方案應(yīng)用于此類患者,因此,國(guó)內(nèi)外對(duì)其模型的治療做了深入的研究。目前,國(guó)內(nèi)外已經(jīng)掌握了建立兔、鼠、綿羊、犬等動(dòng)物SW-RDS模型,且均達(dá)到急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)的標(biāo)準(zhǔn),但多數(shù)模型穩(wěn)定性差、動(dòng)物存活時(shí)間短,不利于后續(xù)治療的研究,因此本實(shí)驗(yàn)嘗試在建立穩(wěn)定模型的同時(shí)保證大鼠的生存時(shí)間,并以慢病毒為載體,構(gòu)建攜帶CXCR4基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs,以提高CXCR4在BMSCs表面的表達(dá),探討普通BMSCs(Dir-BMSCs)及高表達(dá)CXCR4的BMSCs(Dir-CXCR4-BMSCs)在模型中患肺的歸巢情況。【目的】建立穩(wěn)定的大鼠海水淹溺模型,觀察Dir-BMSCs和Dir-CXCR4-BMSCs在大鼠SW-RDS模型中患肺的歸巢情況�！痉椒ā�1大鼠SW-RDS模型的建立40只清潔級(jí)健康的SD大鼠隨機(jī)分為4組(n=10),即空白對(duì)照組(C),海水灌注組(S1、S2、S3),經(jīng)氣管插管按如下劑量灌注配方海水:0ml/kg、2ml/kg、2.5ml/kg、3.0ml/kg。分別于建模后0min、0.5h、1h、2h、4h共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察大鼠的呼吸頻率、經(jīng)右頸總動(dòng)脈抽血行血?dú)夥治?計(jì)算氧合指數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后(4h點(diǎn)),取C組和S3(3.0ml/kg)組大鼠右肺前葉、中葉、后葉及副葉,測(cè)定右肺各葉濕/干重比,并留取大鼠右肺各葉,行肺組織形態(tài)學(xué)觀察和病理學(xué)評(píng)分。2干細(xì)胞的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染、染色及其在SW-RDS模型中患肺的歸巢取60~80g SD大鼠的股骨和脛骨,采用密度梯度離心法結(jié)合全骨髓貼壁分離法分離培養(yǎng)出BMSCs,傳至P4代進(jìn)行細(xì)胞鑒定,然后以慢病毒為載體,構(gòu)建攜帶CXCR4基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs,并經(jīng)Dir染料染色,得到Dir-BMSCs和Dir-CXCR4-BMSCs。另取20只大鼠隨機(jī)分成2組(n=10),對(duì)照組(造模后經(jīng)尾靜脈注射Dir-BMSCs)、實(shí)驗(yàn)組(造模后經(jīng)尾靜脈注射Dir-CXCR4-BMSCs),在4h點(diǎn)觀察干細(xì)胞在大鼠SW-RDS模型中患肺的歸巢情況�！窘Y(jié)果】1建模后,與空白對(duì)照組(C)比較,S3(3.0ml/kg)組大鼠呼吸頻率加快,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);血?dú)馐維3組發(fā)生過(guò)嚴(yán)重的酸中毒、高碳酸血癥及低氧血癥,氧合指數(shù)示在0~0.5h內(nèi),達(dá)到中度ARDS的標(biāo)準(zhǔn),0.5~4h內(nèi)達(dá)到輕度ARDS的標(biāo)準(zhǔn)。在4h點(diǎn)時(shí),S3組右肺各葉的濕/干重比和病理學(xué)評(píng)分與空白對(duì)照組相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),且組內(nèi)比較示前葉、中葉、副葉與后葉之間,各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);2本實(shí)驗(yàn)中分離培養(yǎng)的大鼠BMSCs純度高,細(xì)胞形態(tài)均一呈梭形,CD29、CD90表達(dá)陽(yáng)性,而CD34、CD45表達(dá)陰性,能誘導(dǎo)分化為成脂肪細(xì)胞;在4h點(diǎn)時(shí),干細(xì)胞在SW-RDS模型中患肺的歸巢并不均勻,肺組織ROI值相對(duì)比在對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。【結(jié)論】1向大鼠氣管內(nèi)灌注3.0ml/kg的配方海水能成功建立符合ARDS標(biāo)準(zhǔn)的大鼠模型,且大鼠右肺后葉損傷最為嚴(yán)重;2干細(xì)胞能歸巢于大鼠SW-RDS模型的患肺中,且高表達(dá)CXCR4的BMSCs在SW-RDS模型中患肺的歸巢高于普通的BMSCs。
【關(guān)鍵詞】：CXCR4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 海水淹溺 歸巢
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R649.3
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表3-4
• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分 大鼠海水淹溺模型的建立9-27
• 前言9-10
• 材料和方法10-18
• 結(jié)果18-25
• 討論25-27
• 第二部分CXCR4 轉(zhuǎn)染BMSCs及其在SW-RDS模型中患肺的歸巢27-38
• 前言27
• 材料27-29
• 方法29-32
• 結(jié)果32-35
• 討論35-38
• 全文結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 綜述45-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-57
• 在讀期間撰寫(xiě)論文及參加科研情況57

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本文編號(hào)：1055014