口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)是引起豬、牛、羊等偶蹄動(dòng)物口蹄疫的重要病原,有七個(gè)血清型。全球范圍內(nèi)FMDV O型的流行狀況最為復(fù)雜,我國(guó)近年來(lái)就先后有3個(gè)拓?fù)湫椭械?個(gè)譜系的病毒株傳入并造成流行,是目前防控難度最大的病毒血清型。FMDV O型不同譜系病毒的抗原結(jié)構(gòu)存在明顯差異,表現(xiàn)為抗原匹配性與交叉免疫保護(hù)效果的不同;抗原結(jié)構(gòu)變異分析是口蹄疫防控產(chǎn)品研制需要重點(diǎn)關(guān)注的問(wèn)題。單個(gè)B細(xì)胞抗體技術(shù)是目前篩選識(shí)別不同位點(diǎn)中和抗體的最新方法,為研究抗原結(jié)構(gòu)變異提供了豐富的抗體工具。本研究首先用FMDV O型3個(gè)譜系的毒株免疫牛,然后采集抗凝血分離牛外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)。利用生物素標(biāo)記的FMDV O型146S顆粒作為誘餌抗原,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)從免疫牛PBMCs中分選抗原特異性單個(gè)B細(xì)胞;通過(guò)單細(xì)胞PCR技術(shù)從單個(gè)B細(xì)胞中擴(kuò)增牛IgG抗體重鏈與輕鏈可變區(qū)(VH與VL)基因序列,將可變區(qū)基因插入含有牛IgG抗體恒定區(qū)的pcDNA3.4載體中,構(gòu)建完整IgG抗體的表達(dá)質(zhì)粒。將表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢懸浮細(xì)胞(CHO-S)進(jìn)行抗體表達(dá)與純化。通過(guò)酶聯(lián)...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1血清中FMDV特異性抗體效價(jià)的檢測(cè)Figure2.1ThedetectionoftheFMDV-specificantibodytitersinsera

圖2.1血清中FMDV特異性抗體效價(jià)的檢測(cè)Figure2.1ThedetectionoftheFMDV-specificantibodytitersinse血清中FMDVO型特異性抗體的效價(jià)，我們采用液相LISA檢測(cè)FMDVO型特異性抗體....

圖3.1生物素標(biāo)記抗原WB檢測(cè)結(jié)果

3.1生物素標(biāo)記抗原WB檢測(cè)結(jié)量標(biāo)準(zhǔn)；1：生物素標(biāo)記抗原；.1Analysisofbiotin-labeledantigeightmarker;1:Biotin-labeledantig及表型特征，F(xiàn)MDV特異性B細(xì)胞在感Cs，以分析FMDV特異性....

圖3.2流式分選抗原特異性B細(xì)胞結(jié)果

20圖3.2流式分選抗原特異性B細(xì)胞結(jié)果MDV特異性B細(xì)胞的分布；B：FMDV特異性B細(xì)胞在IgM+B細(xì)胞中的分布和比例；C：FMDV細(xì)胞在IgM-B細(xì)胞中的分布和比例Figure3.2Resultsofthesortedantigen-s....

圖3.3IgG抗體可變區(qū)基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

圖3.3IgG抗體可變區(qū)基因PCR擴(kuò)增結(jié)果M：250bp-IDNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)Figure3.3PCRamplificationofIgGvariableregiongenesM:250bp-IDNAmarkerPCR擴(kuò)增出IgG抗體重....

本文編號(hào)：4032971