發(fā)布時(shí)間：2025-02-09 19:07

　　Newbury-1 virus目前是杯狀病毒科（Caliciviridae family）紐布病毒屬（Nebovirus genus）唯一成員,常用Nebovirus（NeV）表述。NeV為單股正鏈RNA病毒,是致?tīng)倥８篂a的病毒。迄今為止,NeV已經(jīng)在美國(guó)、英國(guó)、巴西、土耳其、日本等12個(gè)國(guó)家檢出,具有廣泛的地域分布。根據(jù)RdRp基因序列,NeV可以分為NB-like、NA1-like和Dijon A216-like 3種基因型;根據(jù)完整VP1序列,NeV可以分為2種基因型（基因1型和基因2型）,其中基因1型又細(xì)分為4個(gè)譜系（譜系1～4）。目前,NeV在我國(guó)的存在及流行情況尚不清楚。本研究旨在調(diào)查NeV在我國(guó)的流行情況及其分子特征,取得了以下成果:1.我國(guó)部分地區(qū)奶牛NeV的分子檢測(cè)和基因組研究采集新疆維吾爾自治區(qū)、四川省、遼寧省、河南省、山東省和陜西省23個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)的307份奶牛糞便樣本（237份腹瀉糞便樣本,70份臨床健康糞便樣本）,采用RT-PCR方法對(duì)NeV進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,NeV在腹瀉糞便樣本的檢出率（48.1%）顯著高于健康糞便樣本（5.70%,P<0.001）,場(chǎng)陽(yáng)性...

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 Nebovirus的研究進(jìn)展
    1.1 Nebovirus的發(fā)現(xiàn)及分類(lèi)
    1.2 Nebovirus致病性
    1.3 Nebovirus的基因組結(jié)構(gòu)和編碼蛋白
    1.4 RdRp的分子特征及功能
        1.4.1 RdRp的分子特征
        1.4.2 RdRp的結(jié)構(gòu)與功能
    1.5 VP1 的分子特征及功能
        1.5.1 VP1 的分子特征
        1.5.2 VP1 的結(jié)構(gòu)與功能
    1.6 Nebovirus的檢測(cè)技術(shù)
        1.6.1 電鏡觀察
        1.6.2 RT-PCR檢測(cè)
        1.6.3 基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的抗體檢測(cè)技術(shù)
    1.7 Nebovirus的流行現(xiàn)狀
    1.8 問(wèn)題與展望
第2章 我國(guó)部分地區(qū)奶牛Nebovirus的分子檢測(cè)和基因組研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 臨床樣本
        2.1.2 主要試劑和儀器
        2.1.3 病毒RNA的提取及cDNA的合成
        2.1.4 RT-PCR檢測(cè)Nebovirus
        2.1.5 與輪狀病毒、冠狀病毒和牛病毒性腹瀉病毒混合感染
        2.1.6 Nebovirus完整VP1和Rd Rp基因片段的克隆
        2.1.7 Nebovirus完整基因組的克隆
        2.1.8 基因序列分析、遺傳進(jìn)化和重組分析
        2.1.9 統(tǒng)計(jì)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 Nebovirus RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
        2.2.2 Nebovirus與輪狀病毒、冠狀病毒和牛病毒性腹瀉病毒混合感染
        2.2.3 RdRp基因片段序列分析、遺傳進(jìn)化及重組分析
        2.2.4 完整VP1 基因序列、遺傳進(jìn)化及重組分析
        2.2.5 2 株奶牛Nebovirus完整基因組序列分析、遺傳進(jìn)化及重組分析
    2.3 討論
        2.3.1 我國(guó)奶牛Nebovirus的流行情況
        2.3.2 我國(guó)奶牛Nebovirus RdRp分子特征
        2.3.3 Nebovirus VP1 的基因型和譜系
        2.3.4 我國(guó)奶牛Nebovirus VP1 分子特征
        2.3.5 我國(guó)奶牛Nebovirus基因組特征
    2.4 小結(jié)
第3章 牦牛Nebovirus分子檢測(cè)和基因組研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 臨床樣本
        3.1.2 主要試劑與儀器
        3.1.3 病毒RNA的提取及cDNA的合成
        3.1.4 RT-PCR檢測(cè)牦牛Nebovirus
        3.1.5 與輪狀病毒、冠狀病毒和牛病毒性腹瀉病毒混合感染
        3.1.6 牦牛Nebovirus完整基因組的克隆
        3.1.7 RT-PCR方法篩選新型Nebovirus
        3.1.8 基因序列分析、遺傳進(jìn)化和重組分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 牦牛Nebovirus的 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
        3.2.2 Nebovirus與輪狀病毒、冠狀病毒和牛病毒性腹瀉病毒混合感染
        3.2.3 牦牛Nebovirus RdRp序列和遺傳進(jìn)化分析
        3.2.4 2 株牦牛Nebovirus基因組的特征
        3.2.5 牦牛腹瀉樣本中新型Nebovirus的 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果
    3.3 討論
        3.3.1 牦牛Nebovirus的流行情況
        3.3.2 新型Nebovirus的基因組特征
        3.3.3 VP1 新基因型的特征
        3.3.4 RdRp新基因型的特征
        3.3.5 新型Nebovirus的流行情況
    3.4 小結(jié)
第4章 檢測(cè)Nebovirus的 Real-time RT-PCR方法的建立
    4.1 材料與方法
        4.1.1 病毒(菌)株核酸和臨床樣本
        4.1.2 主要試劑及儀器
        4.1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
        4.1.4 核酸提取
        4.1.5 陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        4.1.6 反應(yīng)體系及條件的優(yōu)化
        4.1.7 熔解曲線分析和標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        4.1.8 特異性評(píng)價(jià)
        4.1.9 敏感性測(cè)定
        4.1.10 穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
        4.1.11 4 種RT-PCR對(duì)臨床樣本中NeV核酸檢出率的比較
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 引物的特異性
        4.2.2 優(yōu)化的real-time RT-PCR反應(yīng)體系及條件
        4.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及熔解曲線
        4.2.4 方法的特異性
        4.2.5 方法的敏感性
        4.2.6 方法的穩(wěn)定性
        4.2.7 4 種方法對(duì)臨床樣本的復(fù)核率
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄一
致謝



本文編號(hào)：4032726