禽流感病毒不僅引起養(yǎng)禽業(yè)的巨大經(jīng)濟損失,而且還嚴重威脅著人類的健康。引起人類流感大流行的多數(shù)病毒均發(fā)生了禽流感病毒的基因與哺乳動物流感的基因重配,H9N2亞型禽流感病毒在世界范圍內(nèi)廣泛存在,它是當前流行的主要禽流感亞型之一。因此,H9N2亞型禽流感病毒基因與哺乳動物流感病毒發(fā)生基因重配的潛在威脅不容忽視。為了了解禽流感病毒和哺乳動物流感病毒聚合酶蛋白不同組合下對聚合酶活性的影響,本研究構(gòu)建了H9N2亞型禽流感病毒(A/Chicken/Shanghai/2093/2009毒株,簡稱A2093)和幾種哺乳動物流感病毒的PB1、PB2、PA、NP的真核表達質(zhì)粒。利用體外流感病毒復(fù)制子系統(tǒng),在293T細胞上測定了聚合酶和NP蛋白不同組合下聚合酶活性。結(jié)果顯示,哺乳動物流感病毒的聚合酶活性比A2093的聚合酶活性高。當A2093的PB1或NP蛋白分別與哺乳動物流感病毒其他聚合酶蛋白組合時,聚合酶活性保持在較高水平;而PB2或PA與哺乳動物流感病毒其他聚合酶蛋白組合時聚合酶活性顯著降低。反之,哺乳動物流感病毒的PB1或NP與H9N2禽流感病毒其他聚合酶蛋白組合時,聚合酶活性保持在較低水平;然而當哺乳...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 流感病毒概述
    1.2 流感病毒的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制
        1.2.1 流感病毒轉(zhuǎn)錄
        1.2.2 流感病毒復(fù)制
    1.3 流感病毒基因重配
    1.4 聚合酶亞基對流感宿主范圍的影響
        1.4.1 PB2對流感宿主范圍的影響
        1.4.2 PB1對流感宿主范圍的影響
        1.4.3 PA對流感宿主范圍的影響
    1.5 PA-X蛋白簡介
第二章 H9N2亞型禽流感病毒聚合酶及NP蛋白與哺乳動物流感病毒的兼容性
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌種、質(zhì)粒與細胞株
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 生物學軟件
        2.1.5 引物序列
    2.2 實驗方法
        2.2.1 片段的擴增
        2.2.2 重組反應(yīng)
        2.2.3 重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化與鑒定
        2.2.4 陽性質(zhì)粒提取
        2.2.5 聚合酶活性的測定
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 H9N2亞型禽流感病毒和哺乳動物流感病毒單個聚合酶及NP蛋白的兼容性
        2.3.2 A2093毒株與WSN毒株間不同蛋白組合方式下的聚合酶活性
    2.4 討論
第三章 A2093與WSN聚合酶基因重配對病毒復(fù)制的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 質(zhì)粒與細胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
        3.1.4 引物序列
    3.2 實驗方法
        3.2.1 重配病毒的拯救
        3.2.2 重配病毒的鑒定
        3.2.3 重配病毒滴度的測定
        3.2.4 病毒在MDCK細胞上生長曲線
        3.2.5 重配病毒的小鼠致病性實驗
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 重配病毒滴度測定
        3.3.2 重配病毒在MDCK細胞上生長曲線
        3.3.3 重配病毒小鼠致病性結(jié)果
    3.4 討論
第四章 PA-X限制禽流感病毒PA基因重配到哺乳動物流感病毒
    4.1 實驗材料
        4.1.1 病毒株、細胞株、質(zhì)粒、載體
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
        4.1.4 引物序列
    4.2 實驗方法
        4.2.1 聚合酶活性檢測中的不同組合方式蛋白表達水平檢測
        4.2.2 PA對 e GFP蛋白表達影響的研究
        4.2.3 PA抑制e GFP蛋白表達與PA-X關(guān)系的研究
        4.2.4 A2093與WSN PA-X差異研究
        4.2.5 PA-X蛋白對病毒復(fù)制以及對PA重配的影響
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 聚合酶活性檢測中的不同組合蛋白表達水平檢測結(jié)果
        4.3.2 PA對 e GFP蛋白表達影響的結(jié)果
        4.3.3 PA抑制e GFP蛋白表達與PA-X關(guān)系的研究
        4.3.4 A2093與WSN PA-X差異研究結(jié)果
        4.3.5 PA-X蛋白對病毒復(fù)制以及對PA重配的影響
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡歷



本文編號：4033336