隨著分子技術(shù)的發(fā)展和;蚪M計(jì)劃的初步完成,使得運(yùn)用分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇(MAS)成為可能,單核苷酸多態(tài)性(SNP)作為分子標(biāo)記技術(shù)的熱點(diǎn)之一,肉牛育種工作者運(yùn)用此技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)人們生活消費(fèi)品質(zhì)為標(biāo)志的肉品質(zhì)性狀和肉牛生長(zhǎng)狀態(tài)為標(biāo)志的胴體性狀兩個(gè)目標(biāo)的選育。此實(shí)驗(yàn)通過(guò)分子生物學(xué)和生物信息學(xué)相結(jié)合,對(duì)65頭牛中UCP3和THRSP基因上的12個(gè)SNPs多態(tài)性與12個(gè)性狀之間進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,同時(shí)測(cè)定兩個(gè)基因在不同大理石等級(jí)群體中的表達(dá)差異,得到了相關(guān)數(shù)據(jù),獲得了如下結(jié)果:1.利用測(cè)序和PCR-RFLP方法檢測(cè)到UCP3基因的5個(gè)SNPs,利用線性模型對(duì)5個(gè)SNP多態(tài)性位點(diǎn)基因型與胴體性狀和肉品質(zhì)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):UCP3第五內(nèi)含子的5個(gè)SNPs位點(diǎn)。(1)C786G位點(diǎn)CG型個(gè)體脂色等級(jí)和脂肪含量明顯高于CC型個(gè)體(P0.05);位點(diǎn)CC型個(gè)體鮮肉水分含量明顯高于CG型個(gè)體(P0.05)。(2)C782G位點(diǎn)CG型個(gè)體脂色等級(jí)和脂肪含量明顯高于CC型個(gè)體(P0.05);位點(diǎn)CC型個(gè)體鮮肉水分含量明顯高于CG型個(gè)體(P0.05)。(3)A559G位點(diǎn)AG型個(gè)體脂色等級(jí)和脂肪含量明顯高于AA型個(gè)體(P0.05);位點(diǎn)AA型個(gè)體鮮肉水分含量明顯高于AG型個(gè)體(P0.05)。(4)C508T位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的各個(gè)性狀均未達(dá)到差異顯著。(5)G457T位點(diǎn)GT型個(gè)體屠宰前重、眼肌肉長(zhǎng)、三角牛腩等級(jí)、背膘脂肪厚、脂色等級(jí)、肉色等級(jí)、大理石花紋等級(jí)明顯高于GG型個(gè)體(P0.05);GG型個(gè)體鮮肉水分含量高于GT型個(gè)體。2.利用測(cè)序和PCR-RFLP方法檢測(cè)到THRSP基因的7個(gè)SNP位點(diǎn),利用線性模型對(duì)7個(gè)SNP多態(tài)性位點(diǎn)基因型與胴體性狀和肉品質(zhì)性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):THRSP第一內(nèi)含子的6個(gè)SNP位點(diǎn)。(1)Intronl中A790C、A724G、T682C、T470C、G378A五個(gè)位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的各個(gè)性狀均未達(dá)到差異顯著。(2)Intronl中T448C位點(diǎn)TC型個(gè)體大理石花紋等級(jí)明顯高于TT型個(gè)體(P0.05)。(3)THRSP第一外顯子存在1個(gè)SNP位點(diǎn)A193G,此位點(diǎn)AA型對(duì)應(yīng)的鮮肉水含量明顯較高(P0.05);AG型個(gè)體脂肪含量較高(P0.05)。3.UCP3在大理石花紋等級(jí)差異明顯的兩組個(gè)體相應(yīng)表達(dá)量均無(wú)顯著差異(P0.05);THRSP在大理石花紋等級(jí)高的個(gè)體相應(yīng)表達(dá)量明顯高于等級(jí)低的個(gè)體(P0.05)。
【學(xué)位授予單位】:山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號(hào)】:S823.92
文章目錄
摘要
1 前言
1.1 肉牛發(fā)展概況
1.2 UCP3、THRSP基因的研究進(jìn)展
1.2.1 UCP3基因研究進(jìn)展
1.2.2 THRSP基因研究進(jìn)展
1.3 三種常見的SNP檢測(cè)方法概述
1.3.1 SNP標(biāo)記在家畜育種中的應(yīng)用
1.3.2 測(cè)序法
1.3.3 PCR-RFLP方法
1.3.4 PCR-SSCP方法
1.4 熒光定量PCR概述
1.4.1 熒光定量PCR的簡(jiǎn)介
1.4.2 熒光定量PCR的基本原理
1.4.3 熒光定量PCR定量分析的兩種方法
1.4.4 熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)
1.5 本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容及意義
2 材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
2.1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑耗材
2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器設(shè)備
2.1.4 常用溶液及試劑的配制
2.1.5 主要分子生物學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析軟件
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屠宰及分割
2.2.2 評(píng)價(jià)指標(biāo)和計(jì)算方法
2.2.3 肌內(nèi)脂肪含量測(cè)定方法
2.2.4 引物設(shè)計(jì)及分析軟件
2.2.5 UCP3基因與THRSP基因SNP位點(diǎn)的確定
2.2.6 利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)肌肉UCP3基因和THRSP基因的mRNA進(jìn)行相對(duì)定量
2.2.7 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
3.1 總DNA提取結(jié)果
3.2 UCP3與THRSP基因DNA部分片段擴(kuò)增結(jié)果鑒定
3.3 UCP3與THRSP基因SNPs位點(diǎn)的檢測(cè)及關(guān)聯(lián)分析
3.3.1 UCP3基因SNPs位點(diǎn)的確認(rèn)及關(guān)聯(lián)分析
3.3.2 THRSP基因SNPs位點(diǎn)的確認(rèn)及關(guān)聯(lián)分析
3.4 牛的總RNA檢測(cè)
3.5 UCP3、THRSP、B-ACTIN基因DNA部分片段擴(kuò)增結(jié)果檢測(cè)
3.6 UCP3、THRSP基因相對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線和溶解曲線
3.7 UCP3、THRSP基因相對(duì)表達(dá)量及相關(guān)分析
3.7.1 UCP3基因mRNA表達(dá)量測(cè)定結(jié)果
3.7.2 THRSP基因mRNA表達(dá)量測(cè)定結(jié)果
4 討論
4.1 全文討論
4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景討論
4.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
Abstract
附錄1
附錄2
致謝
【參考文獻(xiàn)】
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1592402
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