近年來(lái),抗菌藥物常被作為食品動(dòng)物的添加劑或臨床藥物治療使用,導(dǎo)致豬源大腸桿菌的耐藥性問(wèn)題愈加嚴(yán)重,特別是多重耐藥菌株的出現(xiàn),使得多年來(lái)被棄用的具有腎毒性作用的粘菌素重新回歸臨床使用。但這一現(xiàn)狀并未維持很久,粘菌素這道防線于2015年被細(xì)菌成功攻破。本研究對(duì)2015-2016年從七�。ò不�、河南、湖南、湖北、江西、山西、陜西）采集的病料樣本進(jìn)行大腸桿菌分離鑒定,采用微量肉湯稀釋法對(duì)分離菌株進(jìn)行八大類13種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn),并對(duì)其攜帶耐藥基因進(jìn)行PCR檢測(cè)及測(cè)序分析;采用ERIC分型、多位點(diǎn)序列分型（MLST）和質(zhì)粒接合試驗(yàn)方法,對(duì)mcr-1陽(yáng)性菌株的克隆和水平傳播進(jìn)行分析;對(duì)mcr-1陽(yáng)性重點(diǎn)接合菌株進(jìn)行質(zhì)粒全序列測(cè)序,分析mcr-1質(zhì)粒分子特性,對(duì)mcr-1的傳播控制提供依據(jù)。豬大腸桿菌中mcr-1的陽(yáng)性檢出率為25.5%（78/306）,其中從病豬體內(nèi)分離的102株大腸桿菌中檢測(cè)出46株陽(yáng)性,占比45.1%,從健康豬體內(nèi)分離的204株大腸桿菌中檢測(cè)出32株陽(yáng)性,占比15.7%（P=0.000）。同時(shí),前者對(duì)粘菌素、頭孢噻呋、頭孢喹肟、慶大霉素、阿米卡星、多西環(huán)素、氟苯尼考、恩諾沙星...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 豬源大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀與耐藥基因的流行傳播
        1.1.1 豬源大腸桿菌耐藥現(xiàn)狀
        1.1.2 豬源大腸桿菌耐藥基因的流行傳播
    1.2 豬源大腸桿菌對(duì)粘菌素耐藥現(xiàn)狀
    1.3 mcr-1的流行概況
        1.3.1 動(dòng)物或動(dòng)物源食品中mcr-1的流行現(xiàn)狀
        1.3.2 人源及環(huán)境中mcr-1的流行現(xiàn)狀
    1.4 細(xì)菌對(duì)粘菌素耐藥機(jī)制
    1.5 mcr-1的傳播機(jī)制
        1.5.1 質(zhì)粒介導(dǎo)mcr-1傳播
        1.5.2 插入序列ISApl1
    1.6 本研究的目的與意義
試驗(yàn)一河南等七省豬源大腸桿菌分離及mcr-1的檢測(cè)與流行分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 菌株
            2.1.2 試驗(yàn)藥品及配制
            2.1.3 培養(yǎng)基
            2.1.4 試驗(yàn)試劑
            2.1.5 試驗(yàn)儀器
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)菌分離與鑒定
            2.2.2 藥敏試驗(yàn)
            2.2.3 DNA的提取
            2.2.4 PCR擴(kuò)增及測(cè)序
            2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 大腸桿菌分離鑒定結(jié)果分析
        3.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3 患病豬和健康豬源大腸桿菌耐藥表型對(duì)比分析
        3.4 mcr-1的流行
        3.5 攜帶和不攜帶mcr-1的大腸桿菌耐藥譜對(duì)比分析
    4 討論
        4.1 豬源大腸桿菌的分離特性
        4.2 大腸桿菌多重耐藥分析
        4.3 mcr-1基因流行情況及耐藥差異分析
    5 結(jié)論
試驗(yàn)二 豬源大腸桿菌耐藥基因的檢測(cè)與分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 模板DNA的提取
            2.1.2 試驗(yàn)試劑
        2.2 方法
            2.2.1 DNA模板的提取
            2.2.2 PCR擴(kuò)增及測(cè)序
            2.2.3 β-內(nèi)酰胺類耐藥基因引物及參考文獻(xiàn)
            2.2.6 氨基糖苷類耐藥基因引物
            2.2.4 四環(huán)素類、酰胺醇類和磺胺類耐藥基因引物及參考文獻(xiàn)
            2.2.5 喹諾酮類、多藥外排泵類耐藥基因引物及參考文獻(xiàn)
    3 結(jié)果與分析
        3.1 ESBLs耐藥基因檢測(cè)結(jié)果與分析
        3.2 氨基糖苷類耐藥基因檢測(cè)結(jié)果與分析
        3.3 四環(huán)素類、酰胺醇類和磺胺類耐藥基因檢測(cè)結(jié)果與分析
        3.4 喹諾酮類、多藥外排泵類耐藥基因檢測(cè)結(jié)果與分析
    4 討論
    5 結(jié)論
試驗(yàn)三 mcr-1的快速散播機(jī)制
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 菌株
            2.1.2 試驗(yàn)藥品及配制
            2.1.3 培養(yǎng)基
            2.1.4 試驗(yàn)試劑
            2.1.5 試驗(yàn)儀器
        2.2 方法
            2.2.1 藥敏試驗(yàn)
            2.2.2 DNA的提取
            2.2.3 mcr-1基因的檢測(cè)
            2.2.4 ERIC-PCR分型
            2.2.5 mcr-1陽(yáng)性菌株MLST分型
            2.2.6 mcr-1陽(yáng)性菌接合試驗(yàn)
            2.2.7 攜帶mcr-1基因的質(zhì)粒測(cè)序
    3 結(jié)果與分析
        3.1 藥敏結(jié)果
        3.2 mcr-1陽(yáng)性株ERIC分型結(jié)果
        3.3 mcr-1陽(yáng)性菌株MLST分型結(jié)果
        3.4 質(zhì)粒接合結(jié)果
        3.5 質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果
    4 討論
    5 結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文摘要
附錄一 ：縮略詞表



本文編號(hào)：4031223