本文關(guān)鍵詞：結(jié)核相關(guān)抗原對(duì)初治結(jié)核病患者樹突狀細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用脂多糖(lipopolysaccharides,簡稱LPS)、卡介苗(bacillus calmette-guerin,BCG)和結(jié)核分支桿菌特異性抗原Ag85b(以下簡稱Ag85b)刺激體外培養(yǎng)六天的初治結(jié)核病患者外周血來源的樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DCs),通過觀察DCs表面標(biāo)志CD86、CD83、CD11c、HLA-DR的表達(dá)量及所分泌的細(xì)胞因子IL-12、IL-10、IFN-γ含量的變化,觀察三種抗原對(duì)初治結(jié)核患者DCs免疫功能的影響的差異,尋求調(diào)節(jié)初治結(jié)核病患者外周血DCs免疫功能的最佳抗原,為開發(fā)治療結(jié)核病的新型免疫治療方法提供科學(xué)依據(jù)。方法:1收集石家莊市第五醫(yī)院新入院治療的初治結(jié)核病患者31例,均符合《臨床診療指南-結(jié)核病分冊》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。收集健康體檢者26例作為正常對(duì)照組。2無菌采集結(jié)核病患者和健康體檢者外周血10ml,經(jīng)密度梯度離心分離出單個(gè)核細(xì)胞,分成四組,即:空白對(duì)照組、LPS組、BCG組、Ag85b組。貼壁3h后去除非貼壁細(xì)胞,將貼壁細(xì)胞放在5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔天半量換液,于第6d換液后,其中一組不加刺激物,其余三組分別采用LPS、BCG、Ag85b對(duì)細(xì)胞進(jìn)行干預(yù),第7d收集細(xì)胞。在培養(yǎng)期間觀察細(xì)胞的形態(tài)、大小及生長情況,并拍照記錄。3用流式細(xì)胞儀檢測各組DCs的CD83、CD86、HLA-DR和CD11c的表達(dá)率。4采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測各組DCs培養(yǎng)上清中的IL-12、IL-10、INF-γ的含量。5應(yīng)用SPSS13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,組間及組內(nèi)采用單因素方差分析,P0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1各組外周血DCs形態(tài):初治結(jié)核病患者DCs生長密度比正常對(duì)照組低,形態(tài)也不及正常對(duì)照組典型,經(jīng)三種抗原刺激后,各組DCs胞體飽滿,生長旺盛,具有典型樹突狀結(jié)構(gòu)。2各組外周血DCs表面標(biāo)志的檢測結(jié)果:2.1各組DCs的CD83的表達(dá):健康體檢者空白對(duì)照組、LPS組、BCG組和Ag85b組的外周血DCs的CD83的表達(dá)結(jié)果分別為(10.52±7.36)%、(15.01±9.01)%、(11.91±7.91)%、(11.72±6.88)%;初治結(jié)核病患者分別為(4.93±2.67)%、(11.42±9.51)%、(8.25±6.7)%、(9.16±8.78)%。初治結(jié)核病患者的空白對(duì)照組CD83的表達(dá)率顯著低于健康體檢者的空白對(duì)照組(P=0.001),健康體檢者的LPS組CD83的表達(dá)與其空白對(duì)照組比較顯著增多(P=0.042),初治結(jié)核病患者的LPS組和Ag85b組與其空白對(duì)照組比較顯著增多(P=0.001;0.026)。2.2各組DCs的CD86的表達(dá):健康體檢者空白對(duì)照組、LPS組、BCG組和Ag85b組的外周血DCs的CD86的表達(dá)結(jié)果分別為(74.22±15.84)%、(82.98±11.57)%、(75.5±15.31)%、(81±10.69)%;初治結(jié)核病患者分別為(68.47±15.23)%、(81.48±13.1)%、(75.5±15.31)%、(81±10.69)%。健康體檢者的LPS組CD86的表達(dá)與其空白對(duì)照組比較顯著增多(P=0.025);初治結(jié)核病患者中,LPS組和Ag85b組較空白對(duì)照組顯著增多(P=0.001;0.007)。2.3各組DCs的HLA-DR的表達(dá):健康體檢者空白對(duì)照組、LPS組、BCG組和Ag85b組的外周血DCs的HLA-DR的表達(dá)結(jié)果分別為(84.42±12.06)%、(88.98±8.3)%、(87.34±9.4)%、(88.22±9.86)%,初治結(jié)核病患者分別為(81.77±8.37)%、(90.34±6.35)%、(85.1±7.45)%、(85.1±9.93)%。初治結(jié)核病患者LPS組與其空白對(duì)照組、BCG組和Ag85b組相比顯著增高(P0.001;P=0.02;0.033)。2.4各組DCs的CD11c的表達(dá):健康體檢者空白對(duì)照組、LPS組、BCG組和Ag85b組的外周血DCs的CD11c的表達(dá)結(jié)果分別為(90.02±7.23)%、(89.61±8.26)%、(88.63±9.66)%、(88.87±10.47)%;初治結(jié)核病患者分別為(91.35±5.96)%、(90.54±6.34)%、(90.38±7.67)%、(91.07±6.06)%。初治結(jié)核病患者與健康體檢者各組間比較均無顯著性差異(P0.05)。3各組DCs細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的檢測結(jié)果:3.1各組DCs培養(yǎng)上清IL-12的含量:健康體檢者空白對(duì)照組、LPS組、BCG組和Ag85b組外周血DCs培養(yǎng)上清IL-12的含量分別為(39.00±36.78)pg/ml、(31.50±20.27)pg/ml、(33.79±26.65)pg/ml、(27.07±20.55)pg/ml;初治結(jié)核病患者分別為(30.11±28.70)pg/ml、(27.8±18.21)pg/ml、(21.94±16.70)pg/ml、(22.80±16.05)pg/ml。初治結(jié)核病患者各組間比較均無顯著性差異(P0.05),健康體檢者各組間比較亦均無顯著性差異(P0.05)。3.2各組DCs培養(yǎng)上清IL-10的含量:健康體檢者空白對(duì)照組、LPS組、BCG組、Ag85b組外周血DCs培養(yǎng)上清IL-10的含量分別為(5.98±5.47)pg/ml、(11.37±11.27)pg/ml、(6.67±5.65)pg/ml、(6.28±5.91)pg/ml;初治結(jié)核病患者分別為(2.13±2.01)pg/ml、(10.29±10.1)pg/ml、(1.98±1.53)pg/ml、(2.99±2.87)pg/ml。初治結(jié)核病患者空白對(duì)照組IL-10的含量顯著低于健康體檢者的空白對(duì)照組(P=0.02),在初治結(jié)核病患者中,LPS組IL-10的含量顯著高于空白對(duì)照組、BCG組和Ag85b組(P0.001);健康體檢者中的LPS組含量亦均顯著高于其他三組(P=0.003;0.009;0.005)。3.3各組DCs培養(yǎng)上清IFN-γ的含量:健康體檢者空白對(duì)照組、LPS組、BCG組、Ag85b組外周血DCs培養(yǎng)上清IFN-γ的含量分別為(7.02±6.41)pg/ml、(8.82±8.27)pg/ml、(11.01±10.75)pg/ml、(12.03±11.89)pg/ml;初治結(jié)核病患者分別為(6.92±5.86)pg/ml、(12.45±11.86)pg/ml、(21.08±20.51)pg/ml、(15.44±14.39)pg/ml。經(jīng)三種抗原刺激后,初治結(jié)核病患者和健康體檢者IFN-γ的含量均升高,且初治結(jié)核病患者升高幅度高于健康體檢者。在初治結(jié)核病患者中,BCG組和Ag85b組IFN-γ的含量顯著高于空白對(duì)照組(P0.001;P=0.004)。結(jié)論:1初治結(jié)核病患者免疫功能低下可能是由于DCs成熟功能顯著降低造成的。2 LPS可以顯著提高結(jié)核病患者外周血DCs的成熟度和抗原遞呈能力,但會(huì)增加細(xì)胞因子IL-10的分泌。3 BCG在提高結(jié)核病患者外周血DCs的成熟度和抗原遞呈能力方面較弱,在促進(jìn)IFN-γ分泌的能力方面較強(qiáng)。4 Ag85b在增強(qiáng)結(jié)核病患者外周血DCs的成熟度和抗原遞呈能力及促進(jìn)DCs分泌IFN-γ方面均有較好的效果。
【關(guān)鍵詞】：樹突狀細(xì)胞 結(jié)核病 脂多糖 卡介苗 Ag85B 細(xì)胞因子 流式細(xì)胞術(shù)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R52
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-22
• 附圖22-33
• 附表33-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述41-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49-50
• 個(gè)人簡歷50

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：395169