艾滋病是威脅人類的健康的最重要的傳染病之一,其在全球的流行形勢十分嚴(yán)峻,疫苗是預(yù)防控制傳染病的最有效最經(jīng)濟(jì)的手段,因此研制出安全有效的艾滋病疫苗迫在眉睫。DNA疫苗作為最具發(fā)展?jié)摿Φ男滦鸵呙绮呗?可以有效的誘導(dǎo)細(xì)胞免疫反應(yīng)及體液免疫反應(yīng),同時可以誘導(dǎo)長期免疫記憶。然而,較弱的免疫原性一直是制約DNA疫苗產(chǎn)業(yè)化的瓶頸。本研究優(yōu)化了HIV-1雙表達(dá)盒DNA疫苗pENVPOL及pGAGTNR的免疫策略,并聯(lián)合重組復(fù)制型痘苗病毒疫苗VTKgpe及蛋白疫苗gp140,采用初免-加強(qiáng)策略,大幅度提高了HIV-1疫苗的免疫原性。本研究首先探索了體內(nèi)電穿孔技術(shù)對DNA疫苗質(zhì)粒pENVPOL及pGAGTNR免疫原性的影響。實驗結(jié)果表明,內(nèi)電穿孔技術(shù)可以顯著提升pENVPOL和pGAGTNR質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)的表達(dá)水平。50μg DNA質(zhì)粒使用體內(nèi)電穿孔介導(dǎo)后,誘導(dǎo)的HIV-1 Env特異性抗體反應(yīng)滴度提高了10倍,HIV-1抗原特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)強(qiáng)度提高了1倍；5μg DNA在使用體內(nèi)電穿孔介導(dǎo)后,誘導(dǎo)的Env特異性抗體反應(yīng)滴度仍為50μg單獨肌肉注射組的5倍,總體HIV-1抗原特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)與50μg... 

【文章來源】：中國疾病預(yù)防控制中心北京市

【文章頁數(shù)】：105 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３ＥＬＩＳｐｏｔ檢測Ｔ細(xì)胞免疫反應(yīng)結(jié)果??Ｆｉｇ?１．３?Ｔ?ｃｅｌｌ?ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＥＬＩＳｐｏｔ

Ｅｎｖ抗原特異的體液免疫反應(yīng)ＥＬＩＳＡ測定結(jié)果顯示，ＤＮＡ肌肉注射后電（ＤＮＡ?ＩＭＥ巧組誘導(dǎo)的Ｅｎｖ特異性體液免疫反應(yīng)強(qiáng)度顯著高于單獨肌肉注＋ＩＬ１５?佐劑（ＤＮＡ＆Ｌ－１５?ＩＭ）及?ＤＮＡ＋ＢＣＧ?佐劑組（ＤＮＡ＆ＢＣＧＩＭ），＋ＰＡ－ＭＳＨＡ佐劑組（ＤＮＡ＆ＰＡ?ＩＭ）免疫反應(yīng)強(qiáng)度基本相同。ＤＮＡ加佐劑肌后進(jìn)行體內(nèi)電穿孔刺激誘導(dǎo)的Ｅｎｖ特異性體液免疫反應(yīng)強(qiáng)度均顯著高于應(yīng)的ＤＮＡ加佐劑單獨肌肉注射組。ＤＮＡ＆ＰＡ?ＩＭＥＰ組與ＤＮＡ＆ＢＣＧ?ＩＭ３３??

化刺激的化ＩＳｐｏｔ結(jié)果顯示，ＤＮＡ＆ＰＡ?ＩＭＥＰ組誘導(dǎo)了最為理想的性Ｔ細(xì)胞免疫反應(yīng)口８４９?±?１１７?ＳＦＵ／１０６細(xì)胞），總體Ｔ細(xì)胞免疫ＥＰ?組（１８６５?±１２６ＳＦＵ／１０６?細(xì)胞）提高了?１．５?倍，同時?Ｅｎｖ、Ｐｏｌ、Ｔ免疫反應(yīng)強(qiáng)度也顯著高于ＤＮＡ?ＩＭＥＰ組，表明與ＰＡ－ＭＳＨＡ佐樣進(jìn)行體內(nèi)電穿孔刺激，ＤＮＡ質(zhì)粒可誘導(dǎo)比單獨免疫時更為反應(yīng)。Ｐ〇ｒ持異柱細(xì)胞免疫反應(yīng)結(jié)果顯示，ＤＮＡ加佐劑肌注后體的免疫反應(yīng)強(qiáng)度均顯著高于其相對應(yīng)的ＤＮＡ加佐劑單獨肌肉注－１５?ＩＭＥＰ組誘導(dǎo)的Ｅｎｖ特異性細(xì)胞免疫恆答顯著高于ＤＮＡ＆Ｌ－１加佐劑肌注后電穿孔組誘導(dǎo)的ＴＮＲ特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答顯著高肌肉注射組，同時也均顯著窩于ＤＮＡＩＭＥＰ組。??及ＶＴＫｇｐｅ不同免疫間隔小鼠實驗??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HIV-1 DNA疫苗的免疫效價及其與免疫劑量的相關(guān)性[J]. 郝彥玲,李平,何彥平,孫紅巖,傅晶晶,邵一鳴.  中國生物制品學(xué)雜志. 2012(08)
[2]體內(nèi)電穿孔在質(zhì)粒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移及DNA免疫中的應(yīng)用[J]. 張舟,徐智勇,陳佩,周芳,張憲省,劉勇,邵一鳴.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2010 (06)
[3]用電穿孔方法研究H5N1禽流感病毒DNA疫苗對動物的免疫保護(hù)作用(英文)[J]. 張強(qiáng)哲,秦曦明,董海麗,梁榮,何宏軒,李希,姜北宇,劉湘軍,段明星.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2005(08)



本文編號：2908706