第一部分:手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)是在世界范圍內(nèi)流行的兒童常見傳染病。臨床上主要癥狀以發(fā)熱和手、足、口腔等部位皮疹或皰疹為主要表現(xiàn)。在少數(shù)病例中,患者也會(huì)出現(xiàn)神經(jīng)并發(fā)癥,像腦脊髓炎和無菌性腦膜炎。在亞太地區(qū),已報(bào)道有多次手足口病的大流行,尤其是在整個(gè)南亞地區(qū)。而引發(fā)HFMD的腸道病毒現(xiàn)在主要為腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒A16型(CVA16)。其他腸道病毒如CVA4、CVA6、CVA10等也是該病的病原體。近年來越來越多的證據(jù)表明,在這些病原體中,柯薩奇病毒A10相關(guān)的HFMD發(fā)病率呈上升的趨勢(shì)。CVA10病毒最早在1957年一位新西蘭的手足口病患者身上被分離出來,日本最早報(bào)道發(fā)生流行是在1983年。2008年的時(shí)候新加坡手足口病大流行,約11.8%的患者被檢測(cè)出來是由CVA10病毒感染引起的;同年在歐洲芬蘭的手足口病大流行,也認(rèn)為CVA10是導(dǎo)致疾病發(fā)生的主要病原體。通過哨點(diǎn)檢測(cè)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),2010年手足口病的發(fā)病中CVA10感染率占到了39.9%,高于EV71和CVA16的感染率。在我國大陸地區(qū),用CVA10作為手足口病的感染病原體的檢測(cè)指標(biāo),已經(jīng)和EV71、CVA16的地位相當(dāng)。尤其是近年來,在整個(gè)手足口病的暴發(fā)流行檢測(cè)中,除了EV71和CVA16,CVA10也“功不可沒”。因此,研究CVA10病毒的基因變異和演化非常重要,尤其在發(fā)生手足口爆發(fā)流行的時(shí)候。同時(shí),針對(duì)于該型病毒建立一個(gè)快速診斷的方法也具有重要的意義,特別是針對(duì)病毒感染的檢測(cè)和病毒流行的監(jiān)控方面。本部分的研究工作主要有以下幾個(gè)方面的內(nèi)容:1.快速檢測(cè)柯薩奇A10病毒的實(shí)時(shí)RT-PCR方法在本部分研究中,我們分析了VP1基因的保守區(qū)域,構(gòu)建了在我國大陸地區(qū)流行的CVA10病毒的VP1基因探針。開發(fā)一種快速檢測(cè)CVA10病毒的Taq Man實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)技術(shù),同目前使用的HEV通用引物的常規(guī)檢測(cè)相比該方法更加靈敏、準(zhǔn)確,同時(shí)該方法是一種定量的檢測(cè)方法,對(duì)CVA10病毒的的檢測(cè)限可以達(dá)到10 copies/μl。而此前尚未有VP1基因所構(gòu)建的快速檢測(cè)CVA10病毒的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的相關(guān)研究結(jié)果報(bào)道。2.“三步法”擴(kuò)增CVA10全基因組本研究基于CVA10全基因組序列設(shè)計(jì)了一個(gè)長片段的“三步法”擴(kuò)增CVA10全基因組RT-PCR方法。在實(shí)驗(yàn)過程中設(shè)計(jì)了A105UF/A820,EVP4/A6141和A4879/A1005R三對(duì)引物用于CVA10全長基因組擴(kuò)增。結(jié)果顯示這個(gè)方法能準(zhǔn)確地?cái)U(kuò)增CVA10毒株的三個(gè)重疊的基因,獲得全基因組序列,結(jié)果穩(wěn)定可重復(fù)。與之前發(fā)表的“六步法”RT-PCR方法相比,這一方法快速準(zhǔn)確,而且能夠用于擴(kuò)增從我國大陸地區(qū)分離的CVA10毒株的全基因組。第二部分從天然產(chǎn)物中尋找有效的活性成份并對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)修飾是人們尋找新藥的重要途徑之一。白葉藤堿是一類吲哚并喹啉類的生物堿,最早是從西非的一種用于治療瘧疾的攀爬類灌木植物Cryptolepis sanguinolenta中分離出來的。近年來研究表明這類吲哚并喹啉類化合物具有廣泛的生理學(xué)活性,包括抗菌、抗毒覃堿、解熱抗炎、抗錐形蟲、抗瘧疾等藥理作用。在本部分的研究中,我們首次報(bào)道了8個(gè)新合成的雙取代白葉藤堿衍生物,并選擇了部分革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、真菌和柯薩奇病毒A10作為試驗(yàn)研究對(duì)象,評(píng)價(jià)了這些新合成化合物的抗菌、抗病毒活性。本部分研究結(jié)果顯示,該類化合物具有廣譜的抗菌作用,對(duì)于病毒增殖也具有明顯的抑制作用�？咕矫�:化合物6d和6h呈現(xiàn)出的抗菌活性最強(qiáng)。最小抑菌濃度分析顯示化合物6d對(duì)真菌和所測(cè)試的革蘭陽性菌(肺炎鏈球菌,枯草芽孢桿菌)的抗菌作用優(yōu)于廣譜抗真菌藥物兩性霉素B和氨芐西林,而對(duì)革蘭陰性菌(大腸埃希菌)的抗菌作用則與氨芐西林相當(dāng)。上述結(jié)果提示該類化合物具有成為抗菌藥物先導(dǎo)化合物的條件。抗病毒方面:化合物對(duì)CVA10表現(xiàn)出良好的抗病毒活性。構(gòu)效關(guān)系分析顯示,在白葉藤堿7、8和9,11-位引入兩條側(cè)鏈后,化合物6a-6h抗病毒活性均下降,但沒有一定的規(guī)律。而7、8和9位分別是甲氧基取代時(shí)活性較好,其中9位甲氧基取代(3c)抗病毒活性最好,選擇指數(shù)也最高。由于化合物數(shù)量較少,該數(shù)據(jù)不能夠完全討論出化合物的構(gòu)效關(guān)系,但從結(jié)果我們可以看出,長的側(cè)鏈的引入降低了化合物的細(xì)胞毒性的同時(shí),也降低化合物的抗病毒活性;而短取代基甲氧基的引入則是提高化合物的抗病毒活性,但是相應(yīng)的細(xì)胞毒性也比較強(qiáng)。這些結(jié)果對(duì)于我們后續(xù)進(jìn)行白葉藤堿結(jié)構(gòu)的改造具有重要的指導(dǎo)意義。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R512.5;R440
【部分圖文】：

圖 1 柯薩奇病毒是單股的正鏈小 RNA 病毒，病毒顆粒呈球形，為立體對(duì)稱的二十面體，5’端共價(jià)結(jié)合了大小約為 7kDa 小分子蛋白質(zhì) Vpg，該蛋白與基因組裝配以及病毒 RNA 合成有關(guān)；3’端帶有 polyA 尾。Fig.1 Coxsackievirus structure ， Coxsackievirus is a 7.2-kb single-strands ，positive-sense RNA virus with a single open reading frame joined to a 5’untranslatedregion and a short viral priming protein（VPg）表 1 人類腸道病毒的傳統(tǒng)分類和型別Table 1 Traditional classification and gene classification of human enterovirus

12圖 2 兒童手足口病的典型臨床癥狀[8]Fig.2 Manifestations of typical HFMD1.3 柯薩奇病毒流行病學(xué)情況在既往的主要的研究中，人們發(fā)現(xiàn) EV71 與 CVA16 是導(dǎo)致手足口病的主要病原體。最新的研究發(fā)現(xiàn)，其他一些型別的柯薩奇病毒也能能導(dǎo)致手足口病。自安徽省阜陽等地區(qū)于 2008 年 4 月出現(xiàn)以 EV71 型感染引起的手足口病流行暴發(fā)以來，近幾年來手足口病的發(fā)病數(shù)和發(fā)病率在整個(gè)安徽省都呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)。

2009-2011年中國手足口病患者腸道病毒的分型[14]
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 蔣秀群;;手足口病臨床觀察與治療分析[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2011年32期

2 趙成松;趙順英;;手足口病的流行概況和應(yīng)對(duì)策略[J];中國實(shí)用兒科雜志;2009年06期

3 廖承琳;潘家華;呂勇;徐友和;李曉紅;倪陳;;小兒手足口病289例臨床觀察及治療策略[J];安徽醫(yī)學(xué);2008年04期

本文編號(hào)：2890042