本文關(guān)鍵詞：HBV感染引起的肝癌中HBV cccDNA與AP0BEC3的相關(guān)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是病毒持續(xù)感染的關(guān)鍵因子,為了研究肝癌發(fā)生過(guò)程中宿主對(duì)病毒cccDNA的調(diào)控,我們檢測(cè)了HCC樣本中配對(duì)的癌組織和癌旁組織中HBVcccDNA的表達(dá)水平,并進(jìn)一步分析了宿主抗病毒因子APOBEC家族基因與HBV cccDNA的相關(guān)性。方法：首先通過(guò)特異性熒光定量PCR方法檢測(cè)了49例配對(duì)的癌組織及癌旁組織中肝臟內(nèi)HBV cccDNA和HBV total DNA的表達(dá)水平,并用配對(duì)秩和檢驗(yàn)的方式分析其表達(dá)差異；然后應(yīng)用滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)特異性擴(kuò)增這49對(duì)癌組織及癌旁組織中肝臟內(nèi)HBV cccDNA,測(cè)序后分析HBV基因組的4個(gè)編碼調(diào)控區(qū)域preC/C,RT,X, preS中病毒cccDNA發(fā)生的突變,進(jìn)一步應(yīng)用3D-PCR深入比較癌組織和癌旁組織中cccDNA發(fā)生的G-A突變。通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)了APOBEC3B家族在這49對(duì)癌組織及癌旁組織中肝臟內(nèi)的表達(dá)差異,并通過(guò)Western Blot進(jìn)行驗(yàn)證。最后在細(xì)胞體系中,HepAD38細(xì)胞中過(guò)表達(dá)APOBEC3B質(zhì)粒,研究其對(duì)cccDNA潛在的抑制作用。結(jié)果：在49例患者中,在35例配對(duì)的癌組織和癌旁組織都檢測(cè)到了cccDNA,癌組織HBV cccDNA平均表達(dá)水平顯著低于癌旁組織中(p=0.003),同時(shí)肝臟內(nèi)HBV cccDNA與HBV total DNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)性。通過(guò)滾環(huán)擴(kuò)增,我們分析了HBV cccDNA編碼preC/C和X區(qū),發(fā)生G-A的突變最高,進(jìn)一步用3D-PCR發(fā)現(xiàn)癌組織cccDNA的preC/C區(qū)主要發(fā)生G-A突變,突變率高于癌旁組織(3.9/1000bp vs 0.12/1000bp),并且更多的G-A突變發(fā)生于GpA二聯(lián)核苷酸形式,表明APOBEC3可能參與了HCC中cccDNA的剪切和降解。最后我們分析了APOBEC3家族7個(gè)基因在腫瘤組織和癌旁組織中的轉(zhuǎn)錄水平：APOBEC3A、APOBEC3B和APOBEC3D在癌組織中上調(diào),而APOBEC3C、APOBEC3F、APOBEC3G和APOBEC3H在癌組織下調(diào),其中APOBEC3B在癌組織的表達(dá)上調(diào)具有顯著性差異(P0.05)。HepAD38細(xì)胞中過(guò)表達(dá)APOBEC3B,通過(guò)特異性熒光定量發(fā)現(xiàn)相對(duì)于對(duì)照組,轉(zhuǎn)染APOBEC3B表達(dá)質(zhì)粒后,其HBVcccDNA水平降低,APOBEC3B對(duì)HBV cccDNA抑制率到達(dá)42.1%。結(jié)論：腫瘤中HBV cccDNA表達(dá)水平發(fā)生明顯降低,同時(shí)發(fā)生了較多的G-A突變,這種變化可能是由于腫瘤中APOBEC3B基因表達(dá)上調(diào)引起。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 共價(jià)閉合環(huán)狀DNA 載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽3家族 G-A突變
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R512.62;R735.7
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 1 材料與儀器13-15
• 2. 方法15-29
• 3. 結(jié)果29-39
• 4 討論39-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 文獻(xiàn)綜述：APOBEC3在抗HBV感染中的機(jī)制和作用48-57
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 致謝57-58
• 攻讀學(xué)位期間撰寫和發(fā)表的論文58

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本文編號(hào)：320229