本文關(guān)鍵詞：日本血吸蟲過氧化物氧化還原蛋白SjPrx Ⅰ的表達、純化及對Th2免疫偏移的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景血吸蟲病,又稱為裂體吸蟲病,它是一種傳染性的寄生蟲病,可分為腸血吸蟲病和尿路血吸蟲病。根據(jù)患者病情急緩不同以及宿主體內(nèi)蟲卵的分布位置不同,血吸蟲病的臨床表現(xiàn)不一,主要癥狀有畏寒、發(fā)熱、消瘦、淋巴結(jié)及肝脾腫大等。血吸蟲病的發(fā)生主要是由于宿主感染了裂體吸蟲屬血吸蟲,而能夠傳染給人類的血吸蟲主要有三種,即埃及血吸蟲、曼氏血吸蟲和日本血吸蟲,我國主要流行的是日本血吸蟲病[1]。血吸蟲的早期感染是以Th1反應(yīng)為主的;大約在血吸蟲尾蚴感染6W時雌蟲開始產(chǎn)卵,宿主出現(xiàn)以Th2為主的優(yōu)勢應(yīng)答,體內(nèi)Th2型細胞因子分泌增多。8-9W后,Th2應(yīng)答達到高峰,此后Th1和Th2型細胞因子分泌水平均有所下降;12W后蟲卵內(nèi)毛蚴死亡,SEA逐漸減少至消失,肉芽腫體積減小,形成局部纖維化。發(fā)生Th1型向Th2型的免疫偏移[2]。根據(jù)Th1/Th2免疫偏移理論,人們易于理解血吸蟲感染誘導的Th2免疫應(yīng)答可以抑制Th1介導的自身免疫性疾病;血吸蟲病感染后期,宿主體內(nèi)的Th1型的免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)化成Th2型,血吸蟲病轉(zhuǎn)為慢性,說明Th2型免疫應(yīng)答可抑制Th1型免疫應(yīng)答,這一現(xiàn)象對于Th1介導的自身免疫性疾病有積極意義。越來越多的研究表明以Th2型免疫應(yīng)答為主的寄生蟲感染可以減輕Th1介導的自身免疫性疾病[3]。人們在在肝片吸蟲和曼氏血吸蟲感染的小鼠模型中,發(fā)現(xiàn)了分泌型的抗氧化劑Prx。研究表明在血吸蟲中Prx負責將電子從谷胱甘肽(GSH)和硫氧還蛋白(Trx)轉(zhuǎn)移到H2O2,因此,Prx在血吸蟲分解H2O2的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,是其解毒功能的一個瓶頸分子,也是潛在的治療靶標[4]。目的:通過蟲源性蛋白SjPrxⅠ表達、純化,感染小鼠和刺激細胞,研究SjPrxⅠ在體內(nèi)外誘導Th2免疫應(yīng)答的相關(guān)機制,從而進一步揭示蟲體免疫逃避、宿主免疫耐受、免疫偏移等的分子機制。方法:本實驗首先Gen Bank中找到SjPrxⅠ序列,設(shè)計引物進行PCR擴增,通過轉(zhuǎn)化將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)細胞,然后小量表達菌株,電泳檢測單克隆成功表達。在western驗證蛋白后,大量搖菌表達蛋白后進行純化,得到大量高純度的SjPrxⅠ蛋白。通過腹腔注射免疫小鼠,ELISA檢測脾臟細胞分泌細胞因子的改變。對Sj PrxⅠ蛋白誘導Th2免疫偏移的機制進行全面分析。結(jié)果:(1)大量表達、純化后可得到濃度達0.8mg¤ml的SjPrxⅠ蛋白。(2)LPS刺激的小鼠其脾細胞培養(yǎng)物上清的IL-2、IFN-γ、TNF-α比正常小鼠明顯增高(3)SjPrxⅠ刺激的小鼠其脾細胞培養(yǎng)物上清的IL-4、IL-10與IL-13正常小鼠明顯增高(4)LPS和SjPrxⅠ共同刺激小鼠其脾細胞培養(yǎng)物上清與LPS刺激的小鼠其脾細胞和SjPrxⅠ的培養(yǎng)物上清和單獨LPS或SjPrxⅠ刺激的小鼠其脾細胞培養(yǎng)物上清IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13均無明顯變化,統(tǒng)計學無意義。結(jié)論:本實驗研究結(jié)果顯示日本血吸蟲過氧化物氧化還原蛋白中國大陸株SjPrxⅠ屬于可溶性蛋白,通過轉(zhuǎn)化方式可以得到單克隆表達菌,純化可得到高濃度(0.8mg/ml)蛋白。SjPrxⅠ刺激小鼠后其脾臟細胞懸液細胞因子的變化趨向于Th2偏移,但體內(nèi)同時注射LPS和蛋白以及LPS刺激小鼠的脾細胞加入蛋白培養(yǎng)后的細胞懸液的IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13均高表達,但與單獨腹腔注射LPS或者Sj PrxⅠ比較p0.05,無統(tǒng)計學意義。
【關(guān)鍵詞】：日本血吸蟲 過氧化物氧化還原蛋白 Th2型免疫應(yīng)答
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R532.21
【目錄】：

• 英文縮略詞對照表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-33
• 結(jié)果33-39
• 討論39-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-44
• 附錄44-51
• 1、個人簡歷44-45
• 2、致謝45-46
• 3、綜述46-51
• 參考文獻50-51

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本文編號：307548