本文關(guān)鍵詞：結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌感染者血漿差異表達(dá)microRNA的初步篩選與功能分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的結(jié)核分枝桿菌(tuberculosismycobacterium,MTB)與非結(jié)核分枝桿菌(nontuberculosismycobacterium,NTM)感染肺部疾病患者相比,NTM感染的肺部疾病患者血漿中差異表達(dá)micro RNA(mi RNA)的篩選及驗(yàn)證,并對差異表達(dá)mi RNA調(diào)控的靶基因及其參與的生物學(xué)功能進(jìn)行分析。方法1研究對象選擇:收集唐山市第四醫(yī)院與石家莊第五醫(yī)院2013.10-2014.10期間就診的符合要求的NTM感染肺部疾病患者19例作為NTM組,MTB感染肺部疾病患者37例作為MTB組,取得研究對象知情同意后取其血漿標(biāo)本并進(jìn)行一般情況調(diào)查。從每組中各選取6例研究對象用于芯片篩選;其余研究對象用于Real-time PCR(RT-q PCR)驗(yàn)證。2 NTM感染患者血漿中差異表達(dá)mi RNA篩選及驗(yàn)證:(1)采用Taq Man低密度芯片技術(shù)檢測mi RNA的表達(dá)水平,根據(jù)校正后的兩個(gè)樣本間雜交信號(hào)強(qiáng)度的比值進(jìn)行選擇,比值大于1.8表示差異表達(dá)上調(diào),小于0.7表示差異表達(dá)下調(diào)。(2)采用RT-q PCR技術(shù)驗(yàn)證芯片篩選結(jié)果,兩組間mi RNA表達(dá)水平的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),以P0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。兩組差異表達(dá)mi RNA的相對表達(dá)量用2-△△Ct方法進(jìn)行計(jì)算,2-△△Ct大于1表示表達(dá)上調(diào),2-△△Ct小于1表示表達(dá)下調(diào)。3差異表達(dá)mi RNA靶基因的預(yù)測及功能分析:通過mi Randa、Target Scan和mi Rwalk三個(gè)數(shù)據(jù)庫聯(lián)合對NTM組差異表達(dá)mi RNA的靶基因進(jìn)行預(yù)測。基于Gene Ontology數(shù)據(jù)庫對靶基因進(jìn)行功能預(yù)測,利用Fisher精確檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法計(jì)算每個(gè)GO中靶基因的顯著性,以P-value0.05作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法:對研究對象一般情況采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,其中年齡變量采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),分類資料采用兩獨(dú)立樣本2c檢驗(yàn),以P0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果1 NTM組差異表達(dá)mi RNA篩選及RT-qPCR驗(yàn)證:(1)NTM組差異表達(dá)mi RNA篩選:根據(jù)以下三個(gè)標(biāo)準(zhǔn),本研究共篩選出差異表達(dá)mi RNA 11個(gè),包括上調(diào)mi RNA 8個(gè),分別為hsa-mi R-26a,hsa-mi R-24,hsa-mi R-222,hsa-mi R-191,hsa-mi R-155,hsa-mi R-126,hsa-mi R-122,hsa-let-7b;下調(diào)mi RNA 3個(gè),分別為hsa-mi R-767-3p、hsa-mi R-1283、hsa-mi R-1281。篩選標(biāo)準(zhǔn):①芯片初步篩選中上調(diào)或下調(diào)倍數(shù)較大的mi RNA;②參考既往各種感染性疾病中相關(guān)mi RNA研究報(bào)道;③被Target Scan、mi Rwalk和mi Randa databases數(shù)據(jù)庫同時(shí)驗(yàn)證過,且在調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中功能較為突出。(2)RT-q PCR驗(yàn)證結(jié)果:結(jié)合芯片篩選結(jié)果及以往研究報(bào)道,選取其中上調(diào)倍數(shù)最大的3個(gè)mi RNA和全部3個(gè)下調(diào)mi RNA進(jìn)行驗(yàn)證,分別為has-let-7b、has-mi R-155、has-mi R-26a、has-mi R-1281、has-mi R-1283、hasmi R-767。RT-q PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片篩選結(jié)果一致。2靶基因預(yù)測及功能分析:(1)上調(diào)的mi RNA調(diào)控了關(guān)鍵基因23個(gè);下調(diào)的mi RNA調(diào)控了關(guān)鍵基因59個(gè)。主要調(diào)控以下三方面的生物學(xué)功能:①通過固有免疫應(yīng)答和調(diào)控噬菌溶酶體對病菌的吞噬作用而參與炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié);②通過相關(guān)信號(hào)通路影響細(xì)胞周期而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡影響疾病的進(jìn)程;③通過調(diào)控細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移影響NTM患病的進(jìn)展。(2)靶基因Gene Ontology分析結(jié)果:8個(gè)上調(diào)的mi RNA主要調(diào)節(jié)42個(gè)信號(hào)功能通路,主要通過調(diào)控蛋白激酶和糖質(zhì)新生等過程參與炎癥反應(yīng);3個(gè)下調(diào)mi RNA主要調(diào)節(jié)8個(gè)信號(hào)功能通路,主要通過調(diào)控代謝通路及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與細(xì)胞凋亡等過程。結(jié)論1與MTB感染組比較,NTM組感染者血漿中存在11個(gè)差異表達(dá)mi RNA,其中8個(gè)上調(diào)mi RNA,3個(gè)下調(diào)mi RNA。2 NTM組差異表達(dá)mi RNA主要參與調(diào)控炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：microRNA NTM MTB 基因芯片 功能分析
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R52
【目錄】：

• 摘要4-6
• abstract6-10
• 引言10-12
• 第1章 結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌感染者血漿差異表達(dá)micro RNA的初步篩選與功能分析12-45
• 1.1 研究內(nèi)容與方法12-17
• 1.1.1 主要材料12
• 1.1.2 研究對象的選擇及血漿標(biāo)本的選取12-13
• 1.1.3 差異表達(dá)mi RNA篩選及驗(yàn)證13-16
• 1.1.4 靶基因預(yù)測及功能分析16-17
• 1.1.5 統(tǒng)計(jì)分析17
• 1.2 結(jié)果17-31
• 1.2.1 研究對象一般情況17-18
• 1.2.2 差異表達(dá)mi RNA篩選結(jié)果及驗(yàn)證18-24
• 1.2.3 差異表達(dá)mi RNA靶基因預(yù)測分析24-31
• 1.3 討論31-39
• 1.4 小結(jié)39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 第2章 綜述45-56
• 2.1 NTM和MTB流行現(xiàn)況及診斷研究進(jìn)展46-48
• 2.1.1 分枝桿菌感染肺部疾病流行現(xiàn)狀46-47
• 2.1.2 分枝桿菌檢測方法研究現(xiàn)況47-48
• 2.2 MTB感染結(jié)核病與NTM結(jié)核分枝桿菌鑒別診斷研究現(xiàn)況48-49
• 2.3 mi RNA及其在疾病診斷中的應(yīng)用49-50
• 2.3.1 mi RNA的生物學(xué)功能49
• 2.3.2 mi RNA作為疾病診斷的生物標(biāo)志物的優(yōu)勢49-50
• 2.4 mi RNA在MTB和NTM感染肺病診斷中的應(yīng)用50-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 結(jié)論56-57
• 致謝57-58
• 導(dǎo)師簡介58-59
• 作者簡介59-60
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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2 王震;龔玉華;錢彩娣;孫春紅;王雪梅;施瑜;周麗萍;傅行禮;邵啟祥;;5種結(jié)核桿菌檢測方法的臨床應(yīng)用價(jià)值[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2015年03期

3 代旭磊;柳愛華;寶福凱;文霞;趙勤;汪亞玲;呂松群;;結(jié)核分支桿菌的分子檢測技術(shù)研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2012年08期

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  本文關(guān)鍵詞：結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌感染者血漿差異表達(dá)microRNA的初步篩選與功能分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：302521