第一部分醫(yī)院獲得性艱難梭菌感染流行病學(xué)特征及重癥化危險因素分析艱難梭菌(Clostridium difficile,CD)是一種革蘭陽性的嚴格厭氧芽胞桿菌,屬于條件致病菌。艱難梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)從1978年被證實與長期使用抗生素后引起的偽膜性腸炎有關(guān)以來,目前已經(jīng)成為醫(yī)院內(nèi)獲得性腹瀉的最常見病因。在歐美等西方發(fā)達國家,艱難梭菌已超越耐甲氧西林金黃色葡萄球菌成為最常見的醫(yī)院相關(guān)性感染病原體。隨著近年來抗生素尤其是廣譜抗生素的大量應(yīng)用,以及歐洲和北美地區(qū)高毒力菌株的暴發(fā)流行,在全球范圍內(nèi)CDI的發(fā)病率,復(fù)發(fā)率以及病死率顯著增加。而在我國,僅少部分醫(yī)院逐漸開展了CDI的臨床監(jiān)測,但臨床工作中對CDI的漏診及誤診發(fā)生率仍相對較高,對醫(yī)院獲得性CDI重癥化危險因素及不同類型艱難梭菌對患者預(yù)后的影響分析可借鑒資料相對較少。本研究在2009年9月至2016年9月期間監(jiān)測我國一家綜合性教學(xué)醫(yī)院成人醫(yī)院獲得性CDI發(fā)生情況,進行艱難梭菌分離鑒定,毒素基因及MLST分型檢測,分析成人醫(yī)院獲得性CDI患者的臨床特征,利用Logistic回歸和Cox回歸分別篩選重癥化危險因素和死亡危險因素,并利用Cox回歸模型構(gòu)建感染不同毒素分型和ST型艱難梭菌患者的生存曲線。最終從4199例住院腹瀉患者糞便標本中篩選得到307例成人醫(yī)院獲得性CDI患者,其中A+B+CDT-型艱難梭菌占72.3%(222/307),A-B+CDT-型占23.5%(72/307),A+B+CDT+型菌株占4.2%(13/307)。307株產(chǎn)毒型艱難梭菌共分為33個ST型,ST-54,ST-35和ST-37型為本研究中的優(yōu)勢菌株,其中ST-54型占 18.2%(56/307),ST-35型占 16.5%(41/307),ST-37型占 15.0%(46/307)。根據(jù)CDI診斷標準,307例患者分為重癥組66例以及非重癥組241例;根據(jù)CDI確診后30天內(nèi)是否發(fā)生死亡,307例患者分為死亡組32例和存活組275例。多因素Logistic回歸分析顯示CDI合并血流感染,肺部感染和C反應(yīng)蛋白≥ 100mg/L為成人醫(yī)院獲得性CDI重癥化獨立危險因素。多因素Cox回歸顯示患者年齡≥65歲,CDI合并血流感染,體溫≥38.5℃,機械通氣,結(jié)締組織疾病,大環(huán)內(nèi)酯類抗生素使用史,以及血漿白蛋白水平≤2.5mg/dL為CDI 30天全因死亡獨立危險因素。此外,本研究中發(fā)現(xiàn)患者的預(yù)后與艱難梭菌不同毒素分型和ST型存在著密切的相關(guān)性。本研究可以為臨床醫(yī)務(wù)工作人員及時發(fā)現(xiàn)醫(yī)院獲得性CDI高�；颊�,提高CDI的早期診斷率以及感染防控提供強有力的支持,從而制定有效的CDI預(yù)防和治療策略。第二部分戊糖片球菌LI05防治艱難梭菌感染的機制研究抗生素等藥物的使用可以破壞腸道微生態(tài)平衡,減少腸道菌群的豐度和物種多樣性,從而引起艱難梭菌相關(guān)性腹瀉(Clostridium difficile-associated disease,CDAD)。目前臨床上對CDI的治療主要是使用甲硝唑和萬古霉素,然而有超過20%的CDI患者在接受正規(guī)抗生素治療后會出現(xiàn)復(fù)發(fā),僅在美國每年因CDI而導(dǎo)致的額外醫(yī)療費用就高達15億美元。近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)益生菌的使用可能有助于修復(fù)因CDI造成的腸道菌群紊亂,在防治CDI中起到積極的作用。本研究中,我們通過在CDI小鼠模型中預(yù)防性使用益生菌戊糖片球菌LI05,通過觀察小鼠一般情況及體重變化情況,檢測糞便中艱難梭菌毒素水平,血清和腸道中細胞因子的表達水平,腸道組織病理變化,腸道屏障功能變化,腸道菌群和腸道代謝產(chǎn)物的變化,從而評估戊糖片球菌LI05在防治CDI中的療效并探索其作用機制。研究結(jié)果顯示CDI組小鼠具有典型的CDI腸道病理特征,腸道及血清中細胞因子表達水平明顯升高,腸道屏障功能被破壞,腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生紊亂,有益菌和正常定植菌豐度明顯減少,條件致病菌豐度明顯增加,腸道代謝產(chǎn)物中氨基酸代謝、醇類代謝和糖類代謝與正常組存在著明顯的差異。在預(yù)防性使用戊糖片球菌LI05后,可以明顯減少CDI小鼠體重丟失,降低糞便中艱難梭菌毒素水平,降低CDI小鼠死亡率。戊糖片球菌LI05可以調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu),增加腸道菌群如Rikenellaceae、Porphyromonadaceae、Deferribacteraceae等細菌的豐度,抑制條件致病菌如Escherichia/Shigella的過度繁殖,改善腸道屏障功能,增加緊密連接蛋白ZO-1,occluding,claudin-1的表達,調(diào)節(jié)腸道代謝產(chǎn)物,抑制血清和腸道中促炎因子和趨化因子的過度表達,最終減輕因CDI而引起的局部及全身炎癥反應(yīng)。綜上所述,本研究為用于防治CDI的微生態(tài)制劑的研究篩選出了一株具有潛在臨床應(yīng)用價值的益生菌,戊糖片球菌LI05可以通過調(diào)節(jié)腸道菌群及代謝產(chǎn)物,改善腸道屏障功能和調(diào)節(jié)血清及腸道細胞因子表達從而減輕CDI引起的炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R516
【部分圖文】：

在２００９年９月至２０１６年９月期間于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院收集住院腹瀉??患者的新鮮糞便標本，排除重復(fù)標本后共計４１９９份。對所有標本培養(yǎng)４８小時并進??行鑒定，如圖１－１所示，艱難梭菌菌落肉眼下表現(xiàn)為灰白色，扁平略凸起，邊緣不??整齊，毛破璃樣菌落，無溶血，有馬糞味。如圖１－２所示，光鏡下可見艱難梭菌呈??革蘭陽性粗長芽胞桿菌，芽孢卵圓形，位于菌體次極端。純化后的可疑菌落進行??ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ質(zhì)譜進行鑒定，鑒定分值２．０以上，則認為是艱難梭菌（圖１－３）。??一、，ｇ?ｏ?、??圖１－１艱難梭菌菌落肉眼形態(tài)?圖１－２艱難梭菌革蘭染色圖??１?＆?■???，?■?－?■?■?｜?■?—．?．?■—?■?■■■?￣??１０?－－?，??〇?０?－?丨?Ｉ?Ｉ?｜??ｆ。。?十—＋｜卜……奢Ｉ?‘？???－１．０?－－??－１．５?．?．?—????１???????１?????????１?????????？１??Ｏ?５?１０?１５?２０??ｆｎｉｋ??圖１－３艱難梭菌ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ質(zhì)譜鑒定圖??

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本文編號：2866847