目的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染在全世界流行,在非洲和亞洲地區(qū)感染流行率最高。最新流行病學調(diào)查顯示有20億人曾感染HBV,其中2.4億人為慢性HBV感染者,每年約有65萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝細胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)。乙型肝炎病毒的慢性感染是病毒復制和受損的宿主免疫力相互作用的結(jié)果。由于乙型肝炎病毒感染者固有免疫和適應性免疫系統(tǒng)受損,不能有效地對病毒產(chǎn)生效應,導致持續(xù)性的慢性病毒感染。固有免疫在HBV急性感染期發(fā)揮瞬時作用,并誘導后續(xù)的特異性免疫應答。自然殺傷細胞(nature killer cells,NK Cells)是固有免疫清除細胞內(nèi)病原體和異常細胞的重要病毒應答細胞,它主要通過分泌細胞因子和殺傷功能發(fā)揮作用。殺傷細胞凝集素樣受體亞家族G成員1(Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1,KLRG1)首先發(fā)現(xiàn)于大鼠粘膜型肥大細胞株RBL-2H3上,被認為是一種抑制炎癥介質(zhì)釋放的受體。在人體中KLRG1受體主要在NK細胞和T細胞上表達。有文獻報道在丙肝病人外周血NK細胞上的KLRG1受體表達會促進NK細胞數(shù)量減少和功能受損,其機制主要是抑制NK細胞的增殖、促進NK細胞的凋亡和減少NK細胞炎癥細胞因子的釋放。本研究旨在探求在慢性乙型肝炎病毒感染中KLRG1受體的表達對NK細胞功能的影響。方法1.從120名慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康人外周血中提取單個核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)使用流式細胞儀檢測NK細胞在淋巴細胞中的比例和KLRG1~+NK細胞比例;2.在體外用丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)和離子霉素刺激HBV感染者和健康對照的PBMC,分別檢測外周血PBMC中表達IFN-γ的NK細胞頻數(shù)。3.分析外周血PBMC中NK細胞上KLRG1表達與IFN-γ分泌量的相關性。結(jié)果1.外周血中NK細胞頻數(shù)檢測:通過流式細胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者(120例)和健康對照組(19例)外周血淋巴細胞中NK細胞的比例,分析結(jié)果表明HBV感染組NK細胞頻數(shù)(16.92±7.9%)與健康對照組(10.57±6.5%)沒有明顯差異(P=0.3297)。2.外周血中KLRG1+NK細胞頻數(shù)的分析:通過流式細胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者(120例)和健康對照組(19例)外周血PBMC中KLRG1+NK細胞的比例,發(fā)現(xiàn)HBV感染組KLRG1~+NK細胞比例(49.43±21.2%)明顯高于健康對照組(31.60±17.9%),兩組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001);3.外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK細胞頻數(shù)分析:檢測慢性乙型肝炎病毒感染者(28例)與健康對照組(12例)外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK細胞頻數(shù),發(fā)現(xiàn)HBV感染組外周血PBMC中分泌IFN-γ的NK細胞頻數(shù)明顯少于健康對照組(t=4.801,P0.0001)。進一步分析發(fā)現(xiàn)對照組中分泌IFN-γ的NK細胞頻數(shù),KLRG1~+NK細胞明顯少于KLRG1~-NK細胞(t=8.586,P0.0001);在HBV感染組中分泌IFN-γ的NK細胞頻數(shù),KLRG1~+NK細胞也明顯少于KLRG1~-NK細胞(t=4.801,P0.0001)。與對照組比較,HBV感染組中分泌IFN-γ的KLRG1~+NK細胞頻數(shù)、KLRG1~-NK細胞頻數(shù)均明顯降低(t=2.753,P=0.009;t=6.391,P0.0001)。4.HBV感染者外周血PBMC中NK細胞上KLRG1表達與IFN-γ分泌量的相關性分析:為了進一步闡明NK細胞上KLRG1表達與IFN-γ分泌量之間的關系,用GraphPad Prism 6.03軟件分析了兩組變量的相關性,結(jié)果顯示感染者外周血PBMC中NK細胞上KLRG1表達與IFN-γ分泌量呈現(xiàn)明顯的負相關關系(相關系數(shù)=-0.5470,P=0.0026)。結(jié)論乙型肝炎病毒感染可增加NK細胞KLRG1的表達,并且進一步減少NK細胞中IFN-γ分泌,可能是造成HBV慢性感染的要素。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

2.外周血中 KLRG1+NK 細胞頻數(shù)的分析：通過流式細胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者（120 例）和健康對照組（19 例）外周血 PBMC 中 KLRG1+NK 細胞的比例，發(fā)現(xiàn) HBV 感染組 KLRG1+NK 細胞比例（49.43±21.2%）明顯高于健康對照組（31.60±17.9%），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。見圖 2。圖 1 外周血中 NK 細胞頻數(shù)的檢測。（A）NK 細胞的圈門策略;（B）HBV 感染組與健康對照組 NK 細胞頻數(shù)的比較。Figure 1 Detection of NK cell frequency in peripheral blood. (A) Circulatorystrategy of NK cells; (B) Comparison of NK cell frequency between HBV infectedgroup and healthy control group.A B

2.外周血中 KLRG1+NK 細胞頻數(shù)的分析：通過流式細胞儀檢測慢性乙型肝炎病毒感染者（120 例）和健康對照組（19 例）外周血 PBMC 中 KLRG1+NK 細胞的比例，發(fā)現(xiàn) HBV 感染組 KLRG1+NK 細胞比例（49.43±21.2%）明顯高于健康對照組（31.60±17.9%），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。見圖 2。圖 1 外周血中 NK 細胞頻數(shù)的檢測。（A）NK 細胞的圈門策略;（B）HBV 感染組與健康對照組 NK 細胞頻數(shù)的比較。Figure 1 Detection of NK cell frequency in peripheral blood. (A) Circulatorystrategy of NK cells; (B) Comparison of NK cell frequency between HBV infectedgroup and healthy control group.A B

對照組 12 5.96±2.4HBV 感染組 28 2.59±1.0統(tǒng)計量值 t=2.753P 值 P=0.009組別 例數(shù) 分泌 IFN-γ的細胞頻數(shù)（%）對照組 12 40.95±17.9HBV 感染組 28 15.15±4.1統(tǒng)計量值 t=6.391P 值 P＜0.0001表 4 對照組與 HBV 感染組外周血 PBMC 中分泌 IFN-γ的KLRG1-NK 細胞頻數(shù)比較Table 4 Comparison of the frequency of KLRG1-NK cell secretingIFN-γ in peripheral blood PBMC of control group and HBVinfected groupA BC
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相關碩士學位論文 前1條

1 李鳴鴻;KLRG1受體在慢性乙型肝炎病毒感染中對NK細胞功能的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2838465