背景及目的:肉芽腫性炎癥和纖維化性炎癥是人類血吸蟲感染過程中肝臟的主要病理改變,了解肉芽腫性炎癥的免疫病理過程可能為血吸蟲相關(guān)肝纖維化提供治療靶點和方法。我們研究發(fā)現(xiàn)日本血吸蟲感染在動物水平或者可溶性的蟲卵抗原在細胞水平都可以激活肝星狀細胞內(nèi)的NLRP3炎癥小體。本研究的目的是進一步探討NLRP3炎癥小體在日本血吸蟲感染引起的肝纖維化中的作用,并進一步探討肝星狀細胞內(nèi)NLRP3炎癥小體的激活機制。方法:通過腹部敷貼尾蚴和尾靜脈注射腺相關(guān)病毒8(AAV8)的方法構(gòu)建血吸蟲肝纖維化和NLRP3缺失小鼠模型;用熒光顯微鏡檢測肝組織冰凍切片中的綠色熒光和Western-blotting檢測肝組織中NLRP3的含量驗證NLRP3缺失小鼠模型是否成功構(gòu)建;利用HE和Masson染色方法檢測肝組織損傷情況以及鑒定血吸蟲肝纖維化模型是否成功建立,并驗證NLRP3缺失對血吸蟲肝纖維化的影響;利用激光共聚焦的方法檢測肝組織冰凍切片中NLRP3和ASC以及NLRP3和caspase-1的聚集情況,驗證肝內(nèi)NLRP3炎癥小體的激活情況;檢測肝內(nèi)Desmin和NLRP3的聚集情況,驗證NLRP3炎癥小體在肝星狀細胞中的激活情況;用血吸蟲蟲卵抗原(SEA)體外作用小鼠原代肝星狀細胞,驗證SEA對HSC內(nèi)的NLRP3炎癥小體的激活情況;用免疫共沉淀以及si RNA或藥物抑制的方法探討SEA激活HSC內(nèi)的NLRP3炎癥小體的機制。結(jié)果:感染日本血吸蟲尾蚴和尾靜脈注射AAV8成功構(gòu)建血吸蟲肝纖維化和NLRP3缺失小鼠模型。日本血吸蟲感染引起肝臟結(jié)構(gòu)破壞、肝內(nèi)炎癥細胞浸潤以及膠原纖維沉積增加,抑制NLRP3炎癥小體后減輕。感染日本血吸蟲后小鼠肝組織中NLRP3和ASC、NLRP3和caspase-1以及NLRP3和desmin在肝內(nèi)聚集增加。用SEA(50μg/ml)體外刺激HSC導致細胞內(nèi)活化的caspase-1和細胞上清中IL-1β含量增加,用si RNA轉(zhuǎn)染HSC抑制NLRP3的表達后,細胞內(nèi)活化的caspase-1和上清中IL-1β的含量降低。SEA體外刺激HSC導致細胞內(nèi)p-Syk、p-JNK以及p-p38表達增加,抑制Syk和JNK后,SEA誘導的HSC內(nèi)NLRP3炎癥小體活化降低。免疫共沉淀caspase-1或ASC后,結(jié)果顯示Syk與NLRP3炎癥小體的組成部分之間存在關(guān)聯(lián)。阻斷HSC表面的Dectin-1受體后,SEA誘導的HSC內(nèi)p-Syk、活化的caspase-1以及細胞上清中IL-1β的含量明顯降低。結(jié)論:血吸蟲感染可激活HSC內(nèi)的NLRP3炎癥小體,抑制NLRP3炎癥小體減輕血吸蟲感染引起的纖維化。HSC內(nèi)NLRP3炎癥小體的活化與Syk、Dectin-1受體和JNK有關(guān)。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R532.21;R575.2
【部分圖文】：

AAV8-shNLRP3成功嵌入肝臟組織并抑制肝內(nèi)NLRP3蛋白表達注：Ctrl：正常小鼠組；Ctrl+AAV8-control：正常小鼠組感染AAV8-control組；Infected：

25圖 2 感染血吸蟲以及抑制 NLRP3 炎癥小體對小鼠肝臟病理及肝纖維化的影響注：Ctrl：正常小鼠組；Ctrl+AAV8-control：正常小鼠組感染 AAV8-control 組；Infected：模型組；Infected+AAV8-control：模型組感染 AAV8-control 組；Infected+AAV8-shNLRP3：模型組小鼠感染 AAV8- shNLRP3 組

華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論3.3.2 血吸蟲感染導致小鼠肝星狀細胞內(nèi) NLRP3 炎癥小體形成Desmin 是肝星狀細胞的表面標記蛋白，用共聚焦顯微鏡檢測肝Desmin 的聚集情況，結(jié)果顯示 NLRP3 與 Desmin 在模型組小鼠的肝沉積的蟲卵周圍聚集增加，提示血吸蟲感染導致小鼠肝星狀細胞內(nèi) N形成。見圖 4：

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本文編號：2822161