發(fā)布時(shí)間：2020-09-18 20:52

　　 背景及目的:肉芽腫性炎癥和纖維化性炎癥是人類(lèi)血吸蟲(chóng)感染過(guò)程中肝臟的主要病理改變,了解肉芽腫性炎癥的免疫病理過(guò)程可能為血吸蟲(chóng)相關(guān)肝纖維化提供治療靶點(diǎn)和方法。我們研究發(fā)現(xiàn)日本血吸蟲(chóng)感染在動(dòng)物水平或者可溶性的蟲(chóng)卵抗原在細(xì)胞水平都可以激活肝星狀細(xì)胞內(nèi)的NLRP3炎癥小體。本研究的目的是進(jìn)一步探討NLRP3炎癥小體在日本血吸蟲(chóng)感染引起的肝纖維化中的作用,并進(jìn)一步探討肝星狀細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎癥小體的激活機(jī)制。方法:通過(guò)腹部敷貼尾蚴和尾靜脈注射腺相關(guān)病毒8(AAV8)的方法構(gòu)建血吸蟲(chóng)肝纖維化和NLRP3缺失小鼠模型;用熒光顯微鏡檢測(cè)肝組織冰凍切片中的綠色熒光和Western-blotting檢測(cè)肝組織中NLRP3的含量驗(yàn)證NLRP3缺失小鼠模型是否成功構(gòu)建;利用HE和Masson染色方法檢測(cè)肝組織損傷情況以及鑒定血吸蟲(chóng)肝纖維化模型是否成功建立,并驗(yàn)證NLRP3缺失對(duì)血吸蟲(chóng)肝纖維化的影響;利用激光共聚焦的方法檢測(cè)肝組織冰凍切片中NLRP3和ASC以及NLRP3和caspase-1的聚集情況,驗(yàn)證肝內(nèi)NLRP3炎癥小體的激活情況;檢測(cè)肝內(nèi)Desmin和NLRP3的聚集情況,驗(yàn)證NLRP3炎癥小體在肝星狀細(xì)胞中的激活情況;用血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵抗原(SEA)體外作用小鼠原代肝星狀細(xì)胞,驗(yàn)證SEA對(duì)HSC內(nèi)的NLRP3炎癥小體的激活情況;用免疫共沉淀以及si RNA或藥物抑制的方法探討SEA激活HSC內(nèi)的NLRP3炎癥小體的機(jī)制。結(jié)果:感染日本血吸蟲(chóng)尾蚴和尾靜脈注射AAV8成功構(gòu)建血吸蟲(chóng)肝纖維化和NLRP3缺失小鼠模型。日本血吸蟲(chóng)感染引起肝臟結(jié)構(gòu)破壞、肝內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及膠原纖維沉積增加,抑制NLRP3炎癥小體后減輕。感染日本血吸蟲(chóng)后小鼠肝組織中NLRP3和ASC、NLRP3和caspase-1以及NLRP3和desmin在肝內(nèi)聚集增加。用SEA(50μg/ml)體外刺激HSC導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活化的caspase-1和細(xì)胞上清中IL-1β含量增加,用si RNA轉(zhuǎn)染HSC抑制NLRP3的表達(dá)后,細(xì)胞內(nèi)活化的caspase-1和上清中IL-1β的含量降低。SEA體外刺激HSC導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)p-Syk、p-JNK以及p-p38表達(dá)增加,抑制Syk和JNK后,SEA誘導(dǎo)的HSC內(nèi)NLRP3炎癥小體活化降低。免疫共沉淀caspase-1或ASC后,結(jié)果顯示Syk與NLRP3炎癥小體的組成部分之間存在關(guān)聯(lián)。阻斷HSC表面的Dectin-1受體后,SEA誘導(dǎo)的HSC內(nèi)p-Syk、活化的caspase-1以及細(xì)胞上清中IL-1β的含量明顯降低。結(jié)論:血吸蟲(chóng)感染可激活HSC內(nèi)的NLRP3炎癥小體,抑制NLRP3炎癥小體減輕血吸蟲(chóng)感染引起的纖維化。HSC內(nèi)NLRP3炎癥小體的活化與Syk、Dectin-1受體和JNK有關(guān)。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R532.21;R575.2
【部分圖文】：

AAV8-shNLRP3成功嵌入肝臟組織并抑制肝內(nèi)NLRP3蛋白表達(dá)注：Ctrl：正常小鼠組；Ctrl+AAV8-control：正常小鼠組感染AAV8-control組；Infected：

25圖 2 感染血吸蟲(chóng)以及抑制 NLRP3 炎癥小體對(duì)小鼠肝臟病理及肝纖維化的影響注：Ctrl：正常小鼠組；Ctrl+AAV8-control：正常小鼠組感染 AAV8-control 組；Infected：模型組；Infected+AAV8-control：模型組感染 AAV8-control 組；Infected+AAV8-shNLRP3：模型組小鼠感染 AAV8- shNLRP3 組

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論3.3.2 血吸蟲(chóng)感染導(dǎo)致小鼠肝星狀細(xì)胞內(nèi) NLRP3 炎癥小體形成Desmin 是肝星狀細(xì)胞的表面標(biāo)記蛋白，用共聚焦顯微鏡檢測(cè)肝Desmin 的聚集情況，結(jié)果顯示 NLRP3 與 Desmin 在模型組小鼠的肝沉積的蟲(chóng)卵周?chē)奂黾樱崾狙x(chóng)感染導(dǎo)致小鼠肝星狀細(xì)胞內(nèi) N形成。見(jiàn)圖 4：

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本文編號(hào)：2822161