研究背景丁型肝炎病毒(Hepatitis Delta Virus,HDV)是乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)的衛(wèi)星病毒,必須在HBV或其他嗜肝DNA病毒的輔助下才能包裝成完整的病毒顆粒。HDV的感染能夠引起非常嚴(yán)重的肝臟損傷,加速肝臟的疾病進展,提高肝硬化、肝臟失代償、肝癌甚至死亡的風(fēng)險。乙肝疫苗的實施能夠有效降低HBV的感染率,減少HBV感染者,從而降低HDV的感染流行,但近幾年國際研究顯示,HDV的感染率呈現(xiàn)上升趨勢,并且在人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)陽性的HBV感染人群中顯著高于單獨乙肝表面抗原(Hepatitis B Surface Antigen,HBsAg)陽性的人群。目前,我國HBV處于中度流行,有超過9000萬人為HBV慢性感染者,并且部分地區(qū)HIV疫情嚴(yán)重,截止2017年11月30日,已報告我國存活的HIV感染者和獲得性免疫缺乏綜合癥(Acquired Immune Deficiency Syndrome,AIDS)患者約 75 萬人,調(diào)查顯示有 6.3%-10.9%的HIV感染者合并HBV感染,HDV感染會加重肝臟損傷。因此,有必要對該部分人群進行HDV的感染情況調(diào)查,及時制定合理有效的預(yù)防措施控制HDV.的流行。本研究將對我國慢性HBV感染和HIV/HBV合并感染者進行HDV感染情況調(diào)查,評估感染相關(guān)風(fēng)險因素,分析HDV、HBV和HIV-1主要流行基因型及其之間可能存在的關(guān)系,為我國HDV流行的預(yù)防和控制提供數(shù)據(jù)支持。研究方法基于Taqman探針和實時定量PCR的技術(shù),建立雙靶向HDV核酸檢測的方法。采用世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)HDV國際標(biāo)準(zhǔn)品對該方法進行評價。從全國七個省市自治區(qū)(北京、內(nèi)蒙古自治區(qū)、新疆維吾爾自治區(qū)、廣西壯族自治區(qū)、云南省、四川省和廣東省)的部分醫(yī)院采集慢性乙肝肝炎患者樣本3000人份,其中HIV/HBV合并感染者樣本759人份,對感染者的臨床信息和人口學(xué)信息進行收集。采用HDV抗體和核酸的檢測方法,對收集的樣本進行HDV篩查,調(diào)查我國不同地區(qū)和人群中HDV的感染情況。通過卡方檢驗和Logistic回歸分析HDV感染的相關(guān)因素,及其對肝臟疾病進展的影響。對HDV核酸檢測呈陽性的血清/血漿樣品進行HDV全基因組序列的擴增和測序,獲得HDV全基因組序列;對采集的樣本HBV S區(qū)基因片段和HIV pol基因片段進行擴增和測序,分析三種病毒的感染模式以及分子病毒學(xué)特征。研究結(jié)果一、HDV核酸檢測方法的建立本研究建立了雙靶向HDV核酸檢測的方法,經(jīng)WHO HDV國際標(biāo)準(zhǔn)品評測,最低檢出線為575 IU/ml。本研究建立的HDV核酸檢測方法能夠用于中國地區(qū)HDV流行毒株的檢測,與HDV抗體檢測方法相結(jié)合,可用于中國臨床中HDV的篩查和HDV感染者中HDV病毒活動性監(jiān)測。二、我國七個省市自治區(qū)HDV的感染情況調(diào)查本研究中七個省市自治區(qū)均存在HDV的感染,總體的感染率為2.63%(79/3000)。多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),與HDV感染相關(guān)的因素為HIV的合并感染和研究地區(qū),HDV的感染率在HIV/HBV合并感染人群中顯著高于HIV陰性人群(aOR=9.61,95%CI:5.06-18.27),相對于北京市研究現(xiàn)場,四川省研究現(xiàn)場的HDV的感染率顯著增加(aOR=11.10,95%CI:3.73-33.08)。本研究中,我國不同地區(qū)慢性乙型肝炎患者中HDV感染率存在很大的差異,四川研究現(xiàn)場HDV的感染率最高,為13.88%,并且顯著高于其他六個研究現(xiàn)場:其次是廣西壯族自治區(qū)研究現(xiàn)場,HDV的感染率為5.32%,廣東省研究現(xiàn)場HDV感染率為2.45%,新疆維吾爾自治區(qū)、內(nèi)蒙古自治區(qū)、北京市和云南省四個研究現(xiàn)場HDV感染率較低分別為0.88%,0.50%,0.48%和 0.45%。本研究發(fā)現(xiàn)HDV感染者與非HDV感染者之間,肝臟疾病臨床指標(biāo)具有顯著差異,在HDV感染人群中,天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase,ALT)和總膽紅素水平升高的人群比例以及乙型肝炎病毒e抗體(Hepatitis Be antibody,HBeAb)陽性的人群比例顯著高于非HDV感染人群。說明HDV的感染對肝臟細胞造成了損傷,同時對乙肝病毒的復(fù)制產(chǎn)生了負性影響。經(jīng)Logistic回歸模型分析,發(fā)現(xiàn)四川省研究現(xiàn)場HDV感染的相關(guān)因素除HIV的感染外,還包括性別因素,HDV感染率在男性人群中高于女性。在廣西壯族自治區(qū)研究現(xiàn)場,與非靜脈吸毒者相比,HDV感染率在靜脈吸毒者中顯著增加(aOR=31.83,95%CI:4.71-215.09)。在HIV/HBV合并感染者人群中,相對于新疆研究現(xiàn)場,四川研究現(xiàn)場的HDV感染率顯著增加(aOR=20.67,95%CI:2.56-166.70),且四川研究現(xiàn)場HDV感染率顯著高于其他研究現(xiàn)場;在非HIV感染的慢性乙型肝炎患者中,相對于新疆研究現(xiàn)場,廣西研究現(xiàn)場的HDV感染率顯著增加(aOR=16.74,95%CI:2.50-112.01)。但與廣東省和四川省研究現(xiàn)場差異不顯著。三、我國七個省市自治區(qū)慢性乙型肝炎患者中,HDV、HBV和HIV-1分子病毒學(xué)特征本研究共獲得HDV全基因組序列20條,經(jīng)系統(tǒng)進化樹分析,發(fā)現(xiàn)中國HDV流行毒株的基因型包括HDV-1型和HDV-2a型,其中,在HDV感染率最高的四川地區(qū),HDV的主要流行基因型為HDV-2a型。本研究共獲得HIV-1 pol基因序列236條,HIV-1的主要流行亞型為CRF07_BC,CRF01_AE 和 B',其次是 CRF08_BC,CRF67_01B,CRF57_BC,CRF65_cpx,CRF68-01B。另外,在北京和四川研究現(xiàn)場出現(xiàn)了新的重組型。北京研究現(xiàn)場HIV-1的主要流行亞型為CRFO1_AE(51.61%),CRF07_BC(31.18%)和 B'(10.75%);四川研究現(xiàn)場 HIV-1 的主要流行亞型為CRF07_BC(92.5%)和CRF01_AE(3.75%);廣東省研究現(xiàn)場HIV-1的主要流行亞型為 CRF07_BC(46%),CRF01_AE(22%)和 CRF55_01B(16%)。本研究共獲得790條HBVS區(qū)序列,構(gòu)建系統(tǒng)進化樹分析,HBV的基因型為HBV-C型(52.03%),HBV-B 型(28.86%),HBV-D 型(18.10%),和 HBV-I 型(0.25%)以及6例新的重組基因型。在各研究現(xiàn)場之間HBV基因型分布存在顯著性差異。北京、云南省和內(nèi)蒙古自治區(qū)研究現(xiàn)場的HBV基因型以C型為主,廣東省和廣西壯族自治區(qū)研究現(xiàn)場以HBV-B型為主,新疆維吾爾自治區(qū)研究現(xiàn)場以HBV-D型為主(約占84.11%),四川省研究現(xiàn)場HBV-B型和HBV-C型均為主要的流行基因型,另外還存在兩例HBV-Ⅰ型。本研究中HDV感染者的HBV基因型以HBV-B型和HBV-C型為主,HDV/HBV/HIV合并感染者中,HIV的基因型為CRF07_BC,但HBV基因型和HIV基因型在HDV感染者中的分布與HDV陰性人群沒有明顯差異,均屬于當(dāng)?shù)刂饕牧餍谢蛐�。結(jié)論本研究建立了 HDV核酸的檢測方法,經(jīng)WHO國際標(biāo)準(zhǔn)品評價后,最低檢測線為575 IU/ml。近幾年,首次對全國七個地區(qū)進行較大規(guī)模的慢性乙型肝炎患者以及HIV/HBV合并感染者中HDV感染情況調(diào)查,發(fā)現(xiàn)HDV在我國整體為低流行趨勢,但是四川省研究現(xiàn)場的HIV感染者和廣西壯族自治區(qū)的靜脈吸毒者為HDV感染的高危人群。本研究也發(fā)現(xiàn)HDV的感染可能會對肝臟細胞產(chǎn)生損傷,加重疾病的進展。因此,有必要對我國慢性HBV感染者中的疑似HDV感染進行HDV的篩查,及時指導(dǎo)臨床用藥。對于我國四川研究現(xiàn)場(涼山彝族自治州)和廣西壯族自治區(qū)研究現(xiàn)場需要提高HBV疫苗的覆蓋率,特別是HIV陽性的人群和靜脈吸毒人群,降低HBV的感染率,提高HDV的預(yù)防和控制。本研究為中國大陸地區(qū)對HDV流行的預(yù)防和控制提供了一定的數(shù)據(jù)支持。
【學(xué)位單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

Ｆｉｇｕｒｅ邋Ｉ邋Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ邋ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ邋ｏｆ邋ＨＤＶ邋４逡逑５中國丁型肝炎病毒的流行逡逑ＨＤＶ的流行需要在ＨＢＶ流行的基礎(chǔ)上建立，乙肝疫苗的推廣實施，能夠有效抑ＨＢＶ和ＨＤＶ的感染，中國于丨９９２年實施乙肝疫苗計劃，２００２年納入計劃免疫接種項目２００５年中國實施針對新生兒完全免費乙肝疫苗接種的措施１６，很大程度上降低了乙肝在國的感染率５５，可能由于乙肝疫苗對乙肝感染情況的控制，使得我國科學(xué)家對于ＨＤＶ研究多集中于２００５年之前，在此之后對于ＨＤＶ的感染率調(diào)查多集中于臺灣地區(qū)，大陸區(qū)研究較少。逡逑丨９９２年，對全國３０個省市自治區(qū)的５４１０份ＨＢｓＡｇ陽性樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附行ＨＤＶ抗體的檢測，發(fā)現(xiàn)ＨＤＶ抗體整體的檢出率為１．１５％，在安徽和西藏ＨＤＶ的出率最高分別為５．４５％和５．３８％。然而，在北京、天津、山東、湖北、云南等１４個地區(qū)出ＨＤＶ，整體處于ＨＤＶ低流行趨勢５６。１９９８年，對全國２５個省市１６個民族乙肝感

．４統(tǒng)計學(xué)方法逡逑采用ＳＰＳＳ邋１７．０軟件進行統(tǒng)計分折。分類變量分折采用Ｐｅａｒｓｏｎ’ｓ卡方檢驗或Ｆｉｓｈｅｒ，連續(xù)變量分析采用ｔ檢驗，Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回歸來分析相關(guān)因素。逡逑

采用本研究建立的雙靶向熒光定量ＰＣＲ方法進行檢測。結(jié)果如圖３－１，對于ＨＤ段可檢測的范圍為５７５，０００邋１Ｕ／ｍ丨至５７５邋ＩＵ／ｍｌ，以Ｃｔ值為縱坐標(biāo)，以ＨＤＶＲＮＡ濃度的對數(shù)為橫坐標(biāo)，建立線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為０．９９２３邋（＞邋０．９７即有效），斜宇．是－３．］５低的檢測線為５７５丨Ｕ／ｍＵ然而，對于ＨＤＶＲＮＡ標(biāo)準(zhǔn)品中的Ｙａｍａ片段，該方法可檢有效范圍為５７５，００（ＨＵ／ｍ丨至５，７５０丨Ｕ／ｍｌ，僅出現(xiàn)三個有效的Ｃｔ值，建立線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為０．＂１７邋（＞０．９７即有效），斜率是－５．７０。因此，針對ＨＤＶＲＮＡ標(biāo)準(zhǔn)品中ａｍａ片段，最低的檢測線為５，７５０邋ＩＵ／ｍｌ。逡逑？邐Ｏｉｔａ邋Ｒｎ邋ｖ？邋Ｃｙｃｌｅ逡逑

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本文編號：2816457