【摘要】：目的了解云南省部分鼠疫疫源地中致病耶爾森菌的分布及其流行現(xiàn)狀;完善三種致病耶爾森菌的PCR基因檢測(cè)方法。方法1.樣本采集:共選取云南省野鼠鼠疫疫源地和云南省家鼠鼠疫疫源地共11個(gè)地區(qū),家鼠鼠疫疫源地包括:梁河縣、宜良縣、保山市、彌勒縣、彌渡縣、玉溪市、文山市;野鼠鼠疫疫源地包括:玉龍縣、劍川縣、洱源縣、鶴慶縣。捕鼠采用鼠鋏法;同時(shí)采集部分家鼠鼠疫疫源地的犬類肛拭子。2.三種致病耶爾森氏菌篩查基因確定:通過(guò)對(duì)采集的部分樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn),確定篩查三種致病耶爾森氏菌的目標(biāo)基因。3.PCR初篩:將采取的鼠結(jié)盲腸部及其內(nèi)容物和犬類肛拭子共4985份樣本置于10mL改良磷酸鹽緩沖液(PBS)中,4℃冷增菌15-21天后用其沉淀液提取DNA,并對(duì)foxA、inv、0392基因進(jìn)行PCR篩查。4.細(xì)菌篩查:將初篩過(guò)程中PCR陽(yáng)性樣本接種在CIN瓊脂平板上,于28℃條件下、24h培養(yǎng),挑取可疑菌落對(duì)foxA、inv、0392基因進(jìn)行細(xì)菌PCR篩查。5.保菌處理:對(duì)細(xì)菌篩查陽(yáng)性樣本,提取其DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)并保存其純菌樣本,置于-80℃冰箱保存。6.對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析:數(shù)據(jù)分析采用R×C列聯(lián)表的χ~2檢驗(yàn),使用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果1.三種致病耶爾森氏菌篩查基因確定情況:2016年1-5月采集宜良、麗江、彌勒、彌渡四個(gè)地區(qū)1344份樣本和其他菌株進(jìn)行foxA、inv、F1、0392基因篩查。其中foxA、inv基因分別對(duì)篩查小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、假結(jié)核耶爾森氏菌篩查具有特異性,F1基因?qū)Y查鼠疫耶爾森氏菌會(huì)出現(xiàn)非特異性條帶,0392基因?qū)κ笠咭疇柹Y查不會(huì)出現(xiàn)非特異性條帶具有特異性,采用0392基因作為對(duì)鼠疫耶爾森菌篩查的目標(biāo)基因。2.云南省部分鼠疫疫源地中致病耶爾森菌的分離情況:2016年1月至2017年10月,共采集云南省11個(gè)地區(qū)樣本4985份樣本,其中foxA陽(yáng)性樣本菌株共248株,分離為4.97%;初篩0392陽(yáng)性樣本6份,陽(yáng)性率0.12%、初篩inv陽(yáng)性樣本0份。3.云南省部分鼠疫疫源地中致病耶爾森菌的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:云南省11個(gè)地區(qū)的三種致病耶爾森氏菌陽(yáng)性率不完全相同(χ~2=197.944,P0.05);其中0392基因統(tǒng)計(jì)分析P0.05,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。foxA陽(yáng)性菌株(χ~2=333.74,P0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Inv均為陰性無(wú)差異。4.云南省部分鼠疫疫源地鼠類和犬類統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:鼠類樣本共4284份,犬類樣本共701份。其中鼠類foxA陽(yáng)性菌株有225株,分離率為4.97%。犬類肛拭子foxA陽(yáng)性菌株有23株,分離率為3.28%,統(tǒng)計(jì)分析(χ~2=4.95,P=0.0240.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,即鼠類foxA陽(yáng)性菌株分離率高于犬類肛拭子foxA陽(yáng)性菌株分離率。5.云南省野鼠鼠疫疫源地和家鼠鼠疫疫源地統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:云南省野鼠疫源地和家鼠疫源地foxA陽(yáng)性菌株分離率不完全相同(χ~2=164.51,P0.05),野鼠鼠疫疫源地的foxA陽(yáng)性菌株分離率比家鼠鼠疫疫源地的分離率高。其中在野鼠鼠疫疫源地中玉龍縣的foxA陽(yáng)性菌株分離率比其他三個(gè)縣的分離率高,在家鼠鼠疫疫源地以梁河縣和彌勒縣的foxA陽(yáng)性菌株分離率較高。6.云南省部分鼠疫疫源地foxA陽(yáng)性菌株在鼠類型分布情況:不同鼠類型的foxA陽(yáng)性菌株分離率有差異(χ~2=86.20,P0.05)。其中家鼠鼠疫疫源地鼠類型主要是褐家鼠和黃胸鼠,野鼠鼠疫疫源地鼠類型主要是齊氏姬鼠、大絨鼠和中華姬鼠。對(duì)五種鼠類型進(jìn)行兩兩比較:大絨鼠和齊氏姬鼠的foxA陽(yáng)性菌株分離率要高于其他三種鼠的分離率,且foxA陽(yáng)性菌株分離率主要分布在野鼠鼠疫疫源地,以齊氏姬鼠、大絨鼠為主。7.玉龍縣和劍川縣foxA陽(yáng)性菌株分布情況:玉龍縣鼠類樣本共有853份,以南溪村委會(huì)旦后村foxA陽(yáng)性菌株分離率最高。玉龍縣的鼠類樣本以大絨鼠foxA陽(yáng)性菌株分離率要高于其他類型鼠類。劍川縣樣本包括鼠樣本794份樣本,foxA陽(yáng)性菌株分離率較高地區(qū)主要集中在石龍村和長(zhǎng)樂(lè)村。劍川縣采集鼠類樣本foxA陽(yáng)性菌株分離率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論1.云南省野鼠鼠疫疫源地小腸結(jié)腸炎耶爾森菌鼠類標(biāo)本總體分離率高于家鼠鼠疫疫源地。2.在初篩疫源地現(xiàn)場(chǎng)標(biāo)本或者處理鼠疫疫情時(shí),使用鼠疫菌染色體上的特異基因如YPO0392上基因比在質(zhì)粒上的F1基因進(jìn)行PCR中更具說(shuō)服力。3.在對(duì)疫源地的三種致病耶爾森菌監(jiān)測(cè)中,可采用0392、foxA、inv三種目標(biāo)基因進(jìn)行組合篩查三種致病耶爾森菌。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R516.8;R181.3
【圖文】：

1982-2017年云南省鼠疫流行分布圖

材料與方法1 實(shí)驗(yàn)材料1.1 云南省部分鼠疫疫源地中致病耶爾森氏菌 PCR 檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)材料 云南省 11 個(gè)地區(qū)樣本采集情況對(duì)云南省部分鼠疫疫源地 11個(gè)地區(qū)共采集樣本4985份樣本，其中梁河縣樣量 443 份；玉溪樣本數(shù)量 416 份；玉龍縣鼠樣本數(shù)量 853 份；宜良縣樣本數(shù)5 份；劍川縣鼠樣本數(shù)量 794 份；洱源縣鼠樣本數(shù)量 86 份；鶴慶縣鼠樣本 267 份；保山市樣本數(shù)量 405 份；文山市樣本數(shù)量 402 份；彌勒樣本數(shù)量；彌渡樣本數(shù)量 399 份。見圖 2。

圖 3 11 個(gè)地區(qū)鼠類和犬類樣本采集情況（Figure 3:Sample collection of rodents and dogs in 11 areas）在云南省 11 個(gè)地區(qū)采集的 4284 份鼠類樣本中，其中鼠類型有 15 種，其中包括齊氏姬鼠 1137 份，黃胸鼠 1032 份、絨鼠 761 份、褐家鼠 307 中華姬1 等。具體見圖 4。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2803995