【摘要】：目的：研究維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）基因的單核甘酸多態(tài)性（SNP）位點rs11568820、rs2228570、rs3782905和維生素D結(jié)合蛋白（vitamin D binding protein，DBP）基因SNP位點rs7041在廣西人群中的分布；分析rs11568820、rs2228570、rs3782905和rs7041四個SNP位點與廣西HBV背景下慢性肝炎、肝硬化、肝癌患病風險之間的關系。為HBV感染相關肝病的防治提供新思路。 方法：采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物（PCR-SSP）技術(shù)、聚合酶鏈反應-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）技術(shù)及DNA測序法，對廣西HBV背景下的192例慢性乙型肝炎（CHB）患者、104例肝硬化（LC）患者、184例原發(fā)性肝細胞癌（HCC）以及180例健康體檢者的VDR基因rs11568820、rs2228570、rs3782905和DBP基因rs7041四個SNP位點進行檢測，并使用Roche e601電化學發(fā)光免疫分析儀測定其血清25-羥基維生素D水平。運用SHEsis在線軟件對VDR基因rs11568820、rs2228570、rs3782905位點構(gòu)建單倍型，并分析其與CHB、LC及HCC患病風險之間的關系。使用擬合優(yōu)度2檢驗分析各組各位點基因型分布是否符合哈-溫平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）。使用Logistic回歸分析，對性別、年齡因素進行校正，計算比值比（Odds ration，OR）以及95%可信區(qū)間（Confidence Interval，CI），分析各位點與CHB、LC及HCC患病風險間的關系。 結(jié)果： 1.各組4個位點基因型的頻率分布均符合HWE（p0.05），本研究人群具有代表性和可比性； 2.廣西人群VDR基因rs11568820位點發(fā)現(xiàn)GG、GA、AA三種基因型，GA基因型和A等位基因可降低CHB的患病風險（p=0.045，OR=0.637,95%CI：0.410-0.991；p=0.037，OR=0.725,95%CI：0.536-0.980）。VDR基因rs2228570位點存在CC、CT和TT三種基因型，TT基因可增加CHB和HCC的患病風險（p=0.047，OR=1.792,95%CI：1.008-3.187；p=0.019，OR=2.149,95%CI：1.134-4.075），T等位基因亦可增加CHB和HCC的患病風險（p=0.046，OR=1.342,95%CI：1.005-1.792；p=0.016，OR=1.489,95%CI：1.077-2.060）。VDR基因rs3782905共發(fā)現(xiàn)CC、CG、GG三種基因型，各基因型和等位基因與CHB、LC、HCC的患病風險均無明顯相關（p0.05）。DBP基因rs7041位點出現(xiàn)TT、TG、GG三種基因型，GG基因型可顯著增加LC和HCC的患病風險（p=0.002，OR=4.011,95%CI：1.676-9.603；p=0.026，OR=2.576,95%CI：1.121-5.921），G等位基因可明顯增加LC和HCC的患病風險（p=0.007，OR=1.727,95%CI：1.159-2.572；p=0.024，OR=1.501,95%CI：1.055-2.136）。 3.男性人群中，VDR基因rs11568820位點各基因型和等位基因與CHB、LC、HCC的患病風險均無明顯相關（p0.05）。VDR基因rs2228570位點CT基因型、TT基因型和T等位基因均可增加CHB和HCC的患病風險。VDR基因rs3782905位點各基因型和等位基因與CHB、LC、HCC的患病風險均無明顯相關。DBP基因rs7041位點GG基因型和G等位基因可顯著增加LC、HCC的患病風險。 4.女性人群VDR基因和DBP基因的四個SNP位點均與CHB、LC、HCC的患病風險均無明顯相關（p0.05）。 5.VDR基因rs11568820、rs2228570和rs3782905位點共構(gòu)建出7種單倍型，GTC單倍型可明顯增加CHB的患病風險（p=0.014，OR=1.492,95%CI：1.085-2.054），ACC和GCG單倍型均明顯降低HCC的患病風險（p=0.014，OR=0.572,95%CI：0.365-0.896；p=0.011，OR=0.464,95%CI：0.254-0.847） 6.廣西人群VDR基因和DBP基因4個SNP位點各基因型及等位基因頻率與亞洲地區(qū)黃色人種相近，而與黑色人種和白色人種有較大差異。 7. CHB組、LC組和HCC組三者間兩兩比較，血清25-羥基維生素D水平差異均具有統(tǒng)計學意義（p0.05）,按CHB組、LC組和HCC組遞增。結(jié)論: 1.VDR基因rs11568820位點的GA基因型和A等位基因可能是CHB患病的保護因素；VDR基因rs2228570位點的TT基因型和T等位基因可能是CHB和HCC患病的危險因素；DBP基因rs7041位點GG基因型和G等位基因可能是LC和HCC患病的危險因素。 2. VDR基因rs2228570位點的CT基因型、TT基因型和T等位基因可能是男性人群CHB和HCC患病的危險因素；DBP基因rs7041位點GG基因型和G等位基因可能是男性人群LC和HCC的危險因素。 3.維生素D可能參與HBV背景下肝病的發(fā)生發(fā)展，其水平隨嚴重程度增加而遞增。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62;R575.2;R735.7
【圖文】：

1. PCR 擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果1.1 VDR 基因 rs11568820 位點擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果rs11568820 位點基因型使用 PCR-SSP 技術(shù)進行分析，PCR 擴增反應使用了兩對分別針對 G 等位基因和 A 等位基因的片段特異性引物。只有存在G 等位基因時，才能擴增出 110bp 大小的特異性片段；同理只有存在 A 等位基因時，才能擴增出 235bp 大小的特異性片段。297bp 大小的片段為非特異性產(chǎn)物，在所有樣本的擴增反應中均存在，故不影響分型。當 SNP 位點為 GG 基因型時，PCR 產(chǎn)物為兩條 297bp 和 110bp 的片段；當 SNP 位點為AA 基因型時，PCR 產(chǎn)物為兩條 297bp 和 235bp 的片段；當 SNP 位點為 GA基因型時，PCR 產(chǎn)物為三條 297bp、235bp、110bp 的片段，電泳結(jié)果如圖 1所示。

圖 2 VDR 基因 rs2228570 位點 PCR 擴增產(chǎn)物（1～9 泳道為擴增產(chǎn)物，10 泳道為 marker）1.3 VDR 基因 rs3782905 位點擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果rs3782905 位點的擴增產(chǎn)物片段長度為 304bp，電泳結(jié)果如圖 3 所示。

圖 2 VDR 基因 rs2228570 位點 PCR 擴增產(chǎn)物（1～9 泳道為擴增產(chǎn)物，10 泳道為 marker）1.3 VDR 基因 rs3782905 位點擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果rs3782905 位點的擴增產(chǎn)物片段長度為 304bp，電泳結(jié)果如圖 3 所示。

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

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本文編號：2778566