【摘要】：目的:探討HIV派生的MicroRNA99(miRNA99)對巨噬細胞焦亡的影響及機制。方法:用佛波酯(PMA)刺激人單核白血病細胞(THP-1),使其分化為巨噬細胞,光鏡下觀察細胞的形態(tài),用流式測定細胞表面CD11b,鑒定細胞;將鑒定好的巨噬細胞進行分組,分為PBS組(空白對照)、LPS+ATP組(陽性對照)、miRNA99組(實驗組);采用Leyovc將miRNA99 mimics瞬時轉(zhuǎn)染至巨噬細胞,共培養(yǎng)24H后,采用Western Blot方法測定活化caspase-1蛋白水平;采用ELISA測定細胞上清中IL-18、IL-1β的含量;將巨噬細胞細胞又分為2組,miRNA99+TLR8RNAi質(zhì)粒組、miRNA99+空質(zhì)粒組,轉(zhuǎn)染細胞,在共聚焦下查看細胞內(nèi)熒光;采用Western Blot方法檢測TLR8蛋白及活化caspase-1蛋白水平;用ELISA法測定TLR8沉默之后細胞上清中IL-18、IL-1β的含量。結(jié)果:1.經(jīng)PMA刺激24小時后細胞貼壁生長,伸出偽足,表面CD11b陽性率在99%以上;2.LPS+ATP組與miRNA99組活化caspase-1蛋白水平、上清液中IL-18、IL-1β的含量明顯高于對照組(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義;3.轉(zhuǎn)染TLR8 RNAi質(zhì)粒后巨噬細胞內(nèi)呈現(xiàn)綠色熒光,Western Blot示實驗組TLR8蛋白表達明顯減少。在TLR8質(zhì)粒+miRNA99組,活化caspase-1蛋白水平及上清液中IL-18、IL-1β的含量明顯低于空質(zhì)粒+miRNA99組,(P0.05),差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:1.HIV來源的miRNA99可以誘導巨噬細胞發(fā)生焦亡2.miRNA99誘導焦亡的機制有TLR8途徑的參與3.HIV派生的miRNA99通過細胞焦亡機制使機體產(chǎn)生慢性免疫激活狀態(tài)
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R512.91
【圖文】：

山西醫(yī)科大學碩士學位論文2.2 細胞表面表達 CD11b 的情況流式細胞術(shù)顯示，經(jīng) PMA 刺激 24 小時后，CD11b 在細胞表面的表達率大于99%,這提示了 THP-1 細胞已經(jīng)大部分成功分化成為巨噬細胞，巨噬細胞模型構(gòu)建成功，能在后期實驗中使用。（圖 2A，2B,2C）圖 2 細胞表面表達 CD11b 的情況Fig.2 The positive rate of CD11b on THP-1 cell surface

山西醫(yī)科大學碩士學位論文2.2 細胞表面表達 CD11b 的情況流式細胞術(shù)顯示，經(jīng) PMA 刺激 24 小時后，CD11b 在細胞表面的表達率大于99%,這提示了 THP-1 細胞已經(jīng)大部分成功分化成為巨噬細胞，巨噬細胞模型構(gòu)建成功，能在后期實驗中使用。（圖 2A，2B,2C）圖 2 細胞表面表達 CD11b 的情況Fig.2 The positive rate of CD11b on THP-1 cell surface

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 尹衛(wèi)國;肖建華;;IRAK家族在TLR介導的信號通路中的功能和意義[J];中南醫(yī)學科學雜志;2012年02期

本文編號：2770004