【摘要】：【目的】系統(tǒng)評估結核患者和健康人群的免疫功能�！痉椒ā渴占�23例健康志愿者和38例結核患者的新鮮外周血,通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離外周血單個核細胞(PBMCs)。流式細胞術評估細胞活化分子、抑制性分子和細胞功能。電化學發(fā)光法檢測血清中IFN-γ、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α濃度�！窘Y果】結核患者體內(nèi)IFN-γ、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8和TNF-α分泌均顯著高于健康對照。結核患者效應細胞功能總體呈現(xiàn)減弱趨勢,包括CD4+、CD8+、NK、DC、Mon。然而,調(diào)節(jié)T細胞(Tregs)以及結核特異性的CD4+、CD8+和NK細胞功能顯著增強。CTLA-4、TIM-3、TIGIT、PD-1在結核患者CD4+、CD8+、NK和Tregs表達顯著高于健康志愿者。【結論】結核患者免疫功能變化涉及多種炎癥因子、細胞和分子,呈異質性。結核患者細胞功能失衡,效應細胞功能明顯減弱,抑制性細胞功能增強�！灸康摹垦芯縏IGIT如何影響活動性結核中調(diào)節(jié)性T和效應T細胞的作用及機制�！痉椒ā考{入85例健康志愿者和52例結核患者,使用流式細胞儀檢測TIGIT的表達與Tregs和CD4+效應細胞(Teffs)細胞活化、增殖的關系。使用TIGIT Fc融合蛋白或CD155融合蛋白或對照Ig G與結核患者PBMCs共同孵育,觀察封閉或激活TIGIT信號通路后對Tregs和Teffs細胞活化、分泌細胞因子的能力及增殖功能的影響。最后,阻斷CD4+T細胞的TIGIT信號通路,觀察巨噬細胞控制Mtb生長的能力【結果】結核患者TIGIT在Tregs上高表達且與Tregs的活化和功能正相關。單獨阻斷TIGIT信號通路可以降低Tregs的功能,包括IL-10的分泌和增殖功能,而對Teffs功能沒有作用。盡管阻斷TIGIT對Teffs沒有影響,封閉TIM-3信號通路可以恢復Teffs功能。此外,阻斷CD4+T細胞的TIGIT途徑增強了巨噬細胞控制Mtb生長的能力。【結論】CD4+T細胞上表達的TIGIT很可能主要通過Tregs而不是Teffs在結核感染中發(fā)揮作用。【目的】研究抑制性分子對T-SPOT結果的影響。【方法】納入32例健康志愿者、24例結核T-SPOT高反應(TBAg/PHA≥0.3)和20例結核T-SPOT假陰性/低值(TBAg/PHA0.3)患者,收集新鮮外周血,使用流式細胞儀檢測CD4+、CD8+和NK細胞功能和TIM-3、PD-1的表達。在結核T-SPOT假陰性/低值PBMCs中加入TIM-3和PD-1封閉抗體共同孵育,觀察封閉信號通路后對T-SPOT結果的影響。【結果】結核患者非特異性CD4+、CD8+和NK細胞功能均顯著低于健康對照,T-SPOT高反應患者與T-SPOT低反應患者無差別。然而,T-SPOT高反應患者結核特異性CD4+、CD8+和NK細胞功能強于T-SPOT假陰性/低值患者。T-SPOT假陰性/低值組CD8+PD-1+、NK PD-1+和NK TIM-3+的表達顯著高于T-SPOT高反應性患者。聯(lián)合封閉TIM-3和PD-1信號通路均可部分提高IFN-γ分泌水平和T-SPOT斑點計數(shù)。【結論】TIM-3和PD-1的過表達可導致T-SPOT假陰性/低值,封閉TIM-3和PD-1信號通路可以部分糾正T-SPOT假陰性和低比值,提高T-SPOT準確性。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R52
【圖文】：

數(shù)據(jù)分析和作圖使用GraphPad軟件，兩組間的比較采用Mann Whitney U檢驗。P< 0.05 具有統(tǒng)計學差異（*P < 0.05)。結 果1. 納入研究對象的基本特征本部分納入 61 例研究者，包括 23 例健康對照和 38 例結核患者。研究對象的平均年齡分別為：健康對照 38.6 歲（23-63），結核組 51.0 歲（18-78）。健康組男性占比為 69.5%，結核組男性占比 65.7%。 結核組包括 29 例肺結核患者和 9 例肺外結核患者，肺外結核包括腸結核、腎結核、肝臟結核和結核性腹膜炎。2. 結核患者炎癥因子水平顯著高于健康對照為了評價結核患者體內(nèi)炎癥水平的改變，血清中的 10 種炎癥因子用于檢測。結果發(fā)現(xiàn)結核患者體內(nèi) TNF- 、IL-8、IL-6、IL-1β、IL-12p70、IL-4、IL-2、IL-13、IL-10、IFN-γ 濃度均顯著高于健康對照，說明結核活動時機體呈現(xiàn)免疫激活的狀態(tài)。

+和 NK 細胞分泌 IFN-γ、IL-2和TNF- 能力顯現(xiàn)不同程度的下降（圖2.a）。NK細胞表面CD107a表達顯著減少，表明NK細胞脫顆粒能力降低（圖2.b）。此外，結核患者Mon和DC細胞分泌TNF-能力明顯減弱（圖 2.c）。然而，具有抑制性功能的 Tregs 細胞分泌 IL-10 的能力增強，說明結核患者 Tregs 分泌功能增強（圖 2.d）。圖 2.結核患者非特異性免疫功能評估。從 ATB（n=23）和 HC（n=20）中收集外周血細胞，流式細胞術檢測不同免疫細胞的功能。（a）IFN-γ、TNF- 、IL-2、IFN-γ+TNF-+、IFN-γ+IL-2+和 IL-2+TNF-+在 CD4+、CD8+和 NK 細胞上的表達水平（LeukoAct Cktl With GolgiPlug 刺激）。（b）CD107a 在 CD8+和 NK 細胞上的表達（LeukoAct Cktl With GolgiPlug 刺激）。（c）TNF-在 DC 和單核細胞（Mon）上的表達水平（LPS 刺激）（。d）Tregs 分泌 IL-10 的百分比（aCD3/CD28刺激）。結果表示為 mean±SD。* P <0.05，均代表結核組與對照組比較（Mann-Whitney U-檢驗）。4. 結核患者的結核特異性細胞活化增強且功能增強我們進一步檢測結核特異性的細胞功能，結果表明結核特異性的 CD4+、CD8+和 NK 細胞活性顯著增強（圖 3.a）。此外

圖 3. 結核患者的細胞活化和結核特異性細胞功能。從 ATB（n=23）和 HC（n=20）中收周血單個核細胞，流式細胞術檢測（a）HLA-DR 在 CD4+、CD8+和 NK 細胞上的表達百（ESAT-6/CFP-10 刺激）。（b）IFN-γ 在 CD4+、CD8+和 NK 細胞上的表達百分比（ESAT-6/CF刺激）。結果表示為 mean±SD。* P <0.05，均代表結核組與對照組比較（Mann-Whitney U驗）。5. 結核患者抑制性分子在不同細胞上表達升高為研究抑制性分子在結核中的作用，該研究還檢測了 CTLA-4、TIM-3、TIGPD-1 在不同細胞上的表達。結核患者 CTLA-4 在 CD4+、CD8+和 NK 細胞表達分比均顯著高于健康對照（圖 4.a）。TIM-3 在 CD4+、CD8+、NK 細胞和 Treg的表達顯著增強（圖 4.b）。結核患者 TIGIT 在 CD4+和 Tregs 表達百分比均明顯于健康對照（圖 4.c）。PD-1 在 CD4+、CD8+、NK 細胞和 Tregs 的表達均顯著升（圖 4.d）。以上說明，在結核患者中抑制性分子均在不同細胞水平上上調(diào)，暗

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本文編號：2761908