【摘要】：目的:本課題組前期實驗證實了三氧化二砷(As_2O_3)可以抑制細粒棘球蚴原頭節(jié)活力,破壞原頭節(jié)結(jié)構(gòu),激活caspase-3活性,但其機制尚不清楚。已有研究證實,As_2O_3通過激活氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡,本研究探討As_2O_3誘導(dǎo)細粒棘球蚴原頭節(jié)凋亡的可能機制。方法:本研究用不同濃度的As_2O_3作用于細粒棘球蚴原頭節(jié)不同時間,以新鮮感染的病羊肝臟中提取的細粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象。用0.1%的伊紅溶液染色檢測原頭節(jié)的活力,并根據(jù)數(shù)值繪制活力曲線,熒光顯微鏡觀察原頭節(jié)內(nèi)的ROS產(chǎn)生情況,并檢測相關(guān)的抗氧化酶GSH,SOD活力,試劑盒檢測原頭節(jié)內(nèi)的caspase-3酶的活力和表達量,流式細胞儀檢測原頭節(jié)內(nèi)Ca~(2+)水平,western-blot檢測原頭節(jié)內(nèi)GRP78,caspase-12,Bax,Bcl-2蛋白的表達水平。結(jié)果:伊紅染色結(jié)果:原頭節(jié)活力隨著As_2O_3作用時間的延長和濃度的增加逐步下降;As_2O_3可增加原頭節(jié)的caspase-3酶活性,增加ROS活力,同時降低SOD,GSH活性(P0.05);流式細胞儀檢測結(jié)果:與對照組相比藥物作用后Ca~(2+)濃度升高明顯,具有時間濃度依賴性(P0.05)。western-blot檢測結(jié)果:GRP78、caspase-12和Bax表達水平均明顯升高,Bcl-2蛋白表達水平降低,且均呈現(xiàn)濃度依賴性。結(jié)論:As_2O_3誘導(dǎo)細粒棘球蚴原頭節(jié)凋亡可通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和氧化應(yīng)激途徑途徑,為肝包蟲病提供了一個新的藥物作用靶點。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R532.32
【圖文】：

三氧化二砷通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)細粒棘球蚴原頭節(jié)凋亡結(jié) 果（Results）.不同濃度 As2O3對細粒棘球蚴原頭節(jié)活力的影響實驗結(jié)果顯示 As2O3對體外培養(yǎng)的細粒棘球蚴原頭節(jié)生長具有抑制作用。通過伊紅染色實驗，培養(yǎng) 14d 時，空白對照組原頭節(jié)活力為 95%左右，與對照組相比，各濃度組 As2O3作用后的節(jié)生存活性都有不同程度的抑制。隨著作用時間延長，As2O3對原頭節(jié)的抑制作用逐漸增強。 8μmol/L 作用組對原頭節(jié)活性抑制效果最明顯，培養(yǎng) 2d 時，8μmol/L 作用組原頭節(jié)活性為 82養(yǎng) 2d 時，該濃度組原頭節(jié)活力降低至 43%，其他各藥物作用組對原頭節(jié)活性抑制效果則相對。從圖中可以看出，隨著作用時間延長和濃度增加，As2O3對原頭節(jié)生存的抑制作用越明顯。

16圖 2.不同濃度的 As2O3對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) ROS 的影響*: P<0.05#3對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) SOD 的影響用后細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) SOD 水平的變化，我們采用酶標μmol/L 以及 8μmol/L 的 As2O3分別作用原頭節(jié)時，8μmol/L 4μmol/L 組，二者與對照組相比均下降，4d 組下降的趨勢） 說明 As2O3作用后原頭節(jié)內(nèi) SOD 水平明顯下降，且在 4義（P<0.05）。

圖 3.不同濃度的 As2O3對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) SOD 的影響*: P<0.05#3對細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) GSH 的影響作用后細粒棘球蚴原頭節(jié)內(nèi) SOD 水平的變化，我們采用酶標μmol/L 以及 8μmol/L 的 As2O3分別作用原頭節(jié)時，8μmol/L于 4μmol/L 組，二者與對照組相比均下降，4d 組下降的趨勢） 說明 As2O3作用后原頭節(jié)內(nèi) GSH 水平明顯下降，且在 4意義（P<0.05）。

【參考文獻】

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本文編號：2760049