發(fā)布時(shí)間：2020-07-13 22:16

【摘要】：乙型肝炎、丙型肝炎和艾滋病是三種常見的血液傳染病,嚴(yán)重威脅著人類健康,在臨床輸血和獻(xiàn)血過程中,國家衛(wèi)生部規(guī)定醫(yī)療和衛(wèi)生機(jī)構(gòu)必須對這三種傳染病進(jìn)行強(qiáng)制性檢測。目前,針對這三種血液傳染病的臨床診斷方法有很多,但各有缺點(diǎn):如檢測靈敏度較低,且不能同步定量檢測;需要特殊檢測儀器,且檢測耗時(shí)較長等。針對這些檢測方法的不足之處,本研究將量子點(diǎn)(Quantum dot)技術(shù)和免疫層析技術(shù)相結(jié)合,研制一種量子點(diǎn)免疫層析試紙條,從而實(shí)現(xiàn)乙型肝炎、丙型肝炎和艾滋病的同步定量檢測。本文以EDC/NHS為反應(yīng)活化劑,分別制備530nm CdSe/ZnS QD-抗HBsAg單抗、576nm CdSe/ZnS QD-HCV Ag和620nm CdSe/ZnS QD-HIV Ag偶聯(lián)物,并將三種量子點(diǎn)偶聯(lián)物噴涂于結(jié)合墊上,把抗HBsAg多抗、HCV Ag和HIV Ag包被于NC膜上作為檢測線,質(zhì)控線包被羊抗鼠IgG,然后將樣品墊、結(jié)合墊、NC膜、吸水墊按順序組裝在PVC底板上,制備成量子點(diǎn)免疫層析試紙條。通過熒光閱讀儀閱讀量子點(diǎn)試紙條的檢測帶和質(zhì)控帶的熒光值,根據(jù)不同濃度的HBsAg、HCV抗體和HIV抗體的檢測帶(T)和質(zhì)控帶(C)熒光值的不同,可以得出T/C的比值,此比值對應(yīng)HBsAg、HCV抗體和HIV抗體濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可實(shí)現(xiàn)乙型肝炎、丙型肝炎和艾滋病的同步定量檢測。本課題研究結(jié)果:(1)量子點(diǎn)免疫層析試紙條和膠體金試紙條以及ELISA法同時(shí)檢測臨床標(biāo)本58份,其中HBsAg陽性38份,陰性20份,用量子點(diǎn)試紙條和膠體金試紙條以及ELISA法分別檢測,比較結(jié)果顯示:量子點(diǎn)試紙條的符合率為98.1%,靈敏度為100%,特異性為95%,檢測下限濃度為2.6ng?ml,檢測用時(shí)為10分鐘。相對ELISA法,大大節(jié)省了檢測時(shí)間,與金標(biāo)法相比,靈敏度得到提高。(2)量子點(diǎn)試紙條同步檢測HBsAg和HIVAb時(shí),HBsAg陰性符合率為94.2%,HIVAb陰性符合率為89.6%;HBsAg陽性符合率為87.2%,HIVAb陽性符合率為83.7%;HBsAg檢測靈敏度為95%,HIVAb檢測的靈敏度為90.1%;同步檢測HBsAg和HIVAb時(shí),HBsAg和HIVAb的變異系數(shù)分別為12%和14.5%,均小于15%。(3)量子點(diǎn)免疫層析試紙條同步定量檢測HBsAg、HCV Ab和HIV Ab探索實(shí)驗(yàn)顯示:同步檢測HBsAg、HCV Ab和HIV Ab時(shí),對這三種指標(biāo)的定量檢測下限濃度分別為2.6 ng?ml、15 ng?ml和10 ng?ml。(4)量子點(diǎn)免疫層析試紙條在4-30℃保存1個(gè)月,其穩(wěn)定性、特異性和靈敏度基本不變。通過將量子點(diǎn)技術(shù)和免疫層析技術(shù)相結(jié)合,以量子點(diǎn)作為熒光標(biāo)記物,從而取代膠體金,研制一種量子點(diǎn)免疫層析試紙條,非常適合血液及其他樣品的同步定量分析,可以實(shí)現(xiàn)乙型表面抗原、丙肝抗體和艾滋病抗體進(jìn)行同步定量檢測,從而使得血液傳染病的檢測更為簡單、快速和經(jīng)濟(jì),并建立一種特異性強(qiáng)、靈敏度高和穩(wěn)定性好的膜相同步定量檢測方法。
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R512.6;R512.91
【圖文】：

免疫層析試紙條的結(jié)構(gòu)

量子點(diǎn)免疫層析試紙條和膠體金層析試紙條的組成基本一樣，所不同的是量子點(diǎn)免疫試紙條的結(jié)合墊上噴涂的是免疫量子點(diǎn)。其組成結(jié)構(gòu)如圖4-1。圖3-1 量子點(diǎn)免疫層析試紙條的結(jié)構(gòu)組成

子點(diǎn)試紙條與 CGIS 和 ELISA 法檢測 HBsAg 臨床樣品集臨床樣品 58 份，其中 HBsAg 陽性樣本 38 份，HBsAg 陰本課題研制的量子點(diǎn)試紙條、HBsAg 診斷膠體金試紙條和劑盒檢測臨床樣品，三種方法檢測臨床 HBsAg 樣品得出進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，評估量子點(diǎn)試紙條檢測 HBsAg 的各項(xiàng)參數(shù)與討論子點(diǎn)-抗 HBsAg 單抗偶聯(lián)物的鑒定結(jié)果.2 節(jié)的實(shí)驗(yàn)，我們得到 530nm CdSe/ZnS QD-抗 HBsAg 單斑點(diǎn)和電泳驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果如圖 3-2和圖 3-3；熒光光譜和如圖 3-4 和圖 3-5。

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本文編號(hào)：2754053