【摘要】：研究背景乙型肝炎病毒(HBV)是引起乙型肝炎的病原體,在全球范圍內(nèi)廣泛流行,據(jù)估算大約有20億人口被感染,其中接近3億為慢性的乙肝病毒攜帶者。乙肝病毒表面抗體的出現(xiàn)表明患者曾經(jīng)接種過乙肝疫苗,或者曾經(jīng)感染過乙肝病毒,現(xiàn)處于感染的恢復(fù)期和具有一定的免疫力�；仡櫦韧芯�,曾有報(bào)道指出,在慢性乙肝病毒攜帶者中,可在患者血清中同時(shí)檢測到乙肝表面抗原(HBsAg)和乙肝表面抗體(HBsAb),全球報(bào)道出現(xiàn)雙陽性的概率約為2.43%-8.90%~([1-7])。有報(bào)道稱HBV表面抗原和抗體的雙陽性是由于HBV突變引起,這種突變可能是由于免疫逃逸所造成的選擇性作用~([4,6,8-11])。然而,也有研究者發(fā)現(xiàn)HBsAb陽性與陰性的乙肝患者中發(fā)生HBsAg突變的情況沒有顯著性差異,因此認(rèn)為雙陽性可能與患者同時(shí)感染不同亞型的HBV有關(guān)聯(lián)~([12])。因此HBsAg和HBsAb雙陽性的潛在機(jī)制仍然是模糊和有爭議的。研究目的分析2014-2016年間,廣州地區(qū)乙型肝炎表面抗原和表面抗體雙陽患者的流行率及其血清學(xué)特征,分析出現(xiàn)雙陽性流行率差異的影響因素。并評(píng)估中國慢性乙肝患者S基因主要親水區(qū)域突變與表面抗原和表面抗體雙陽性血清學(xué)資料之間的關(guān)系,探究其發(fā)生的可能機(jī)制及臨床意義,對(duì)慢性乙型肝炎的診斷、治療方案及病情評(píng)估具有重要意義。研究方法1.利用雅培I2000化學(xué)發(fā)光微粒免疫自動(dòng)檢測平臺(tái)對(duì)HBV血清學(xué)標(biāo)志物五項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測,患者的五項(xiàng)乙肝標(biāo)志物為HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。標(biāo)本來源為2014-2016年間,在廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診的慢性HBV感染患者。采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析,得出廣州地區(qū)乙型肝炎表面抗原和表面抗體雙陽患者的流行率。2.采用巢式PCR對(duì)2015年的兩組Ⅰ組(44例)HBsAg(+)/HBsAb(+),Ⅱ組(88例)HBsAg(+)/HBsAb(-)共132例患者的血清病毒DNA進(jìn)行擴(kuò)增,通過直接測序技術(shù)檢測乙肝病毒的S基因序列。并用序列比對(duì)軟件MEGA6、統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0對(duì)S基因突變結(jié)果進(jìn)行分析。研究結(jié)果1.本研究統(tǒng)計(jì)了2014-2016年13,369名HBsAg陽性病人,HBsAg和HBsAb雙陽患者559名,流行率分別為4.52%、4.02%和4.04%;HBsAg和HBsAb雙陽病人中,男性患者所占比例更高,主要表現(xiàn)為“HBsAg(+)、HBsAb(+)、HBeAg(-)、HBeAb(+)、HBcAb(+)”模式,HBeAb陽性的病人出現(xiàn)的概率更大,占68.34%,并且以低濃度HBsAb10.00~100.00 mIU/ml為主,占89.44%。2014年、2015年和2016年雙陽性患者的年齡、性別差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),HBeAg陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)(p0.05),其中,2015年的平均年齡顯著高于2014年和2016年,2015年的男性比例顯著低于2014年和2016年。2.在兩組患者中,HBV基因型主要為B型(56.82%)和C型(43.18%);兩組患者的年齡、性別和HBV基因型分布,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。但是Group I患者的HbeAg陽性率明顯高于Group II,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.001)。I組患者中以低濃度HBsAb 10.00~100.00 mIU/ml為主,占86.36%;主要親水區(qū)域(MHR)發(fā)生突變的比例為59.09%;I組患者M(jìn)HR每100個(gè)氨基酸的變異數(shù)約為II組患者的7.1倍(2.50vs0.35,p0.001),至少發(fā)生兩個(gè)氨基酸突變的有16名患者,其中12名患者(31.82%,12/44)來自I組,只有2名患者(2.27%,2/88)來自II組(p0.001);突變主要發(fā)生在“α”決定簇(3.41vs0.90,p0.001)。此外,兩組還存在下列差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,MHR1(2.81vs0.05,p0.001)、MHR3(4.38vs1.06,p0.001)、MHR4(2.05vs0.68,p0.05)、MHR5(1.24vs0,p0.001)。但是兩組在MHR2差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.27vs0.57,p=0.099)。兩組患者的點(diǎn)突變也存在顯著差異,I組中突變點(diǎn)主要是s101Q、s114S、s120P、s126T/I、s129Q、s131T、s133M和s145G,突變頻率更高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的是sQ101K、sT131N和sM133L(p0.05)。研究結(jié)論1.廣州地區(qū)HBsAg和HBsAb雙陽性的流行率為4.18%。HBsAg與HBsAb雙陽模式出現(xiàn)在男性患者的概率更高,HBeAg轉(zhuǎn)換為HBeAb其傳染性并未減弱;以低濃度HBsAb為主,可能說明雙陽患者的HBsAb是在感染期間形成的。2.在兩組患者中,Group I組患者的HbeAg陽性率更高,說明其傳染性比Group II組更強(qiáng);但是ALT水平低,可能說明雙陽患者對(duì)機(jī)體的影響是長期作用的結(jié)果;I組發(fā)生S基因突變的頻率更高,提示S區(qū)基因尤其是“α”決定簇的突變?cè)斐闪穗p陽的發(fā)生;突變主要位于“α”決定簇的第1環(huán)(MHR3),可能說明HBV突變不是受到人工主動(dòng)免疫和/或者人工被動(dòng)免疫、或者接受核苷類似物治療的影響,而是患者在感染期間形成的HBsAb對(duì)乙型肝炎病毒長期的篩選壓力致使HBV選擇免疫逃逸突變引起的,并最終導(dǎo)致HBsAg與HBsAb雙陽性的出現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R512.62
【圖文】：

前言為 C 基因（549bp）和前 C 基因，C 基因編碼 HBcAg，前 C 基因編碼 HBeAg；P（2496bp）在所有開發(fā)閱讀框最長，大概占基因組 75%以上，編碼乙肝病毒 DNA聚酶；X 區(qū)（462bp）編碼 X 蛋白。這 4 種 mRNA 相互重疊并且終止于同一個(gè)olyA 位點(diǎn)區(qū)，其中 3.5 kb 的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以作為 HBV 的前基因組 RNA 通過逆轉(zhuǎn)生成整個(gè)的 HBV 基因組，即 cccDNA。

表 3 2014-2016 年乙肝表面抗原抗體雙陽病人乙肝 e 抗原和 e 抗體血清學(xué)分析陽性模式 例數(shù) 構(gòu)成比 %1235 133 23.79%（133/559）1245 382 68.34%（382/559）125 44 7.87%（44/559）備注：1、2、3、4、5 分別代表 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和 HBcAb2.3 乙肝表面抗原和抗體雙陽性患者不同的 HBsAg 和 HBsAb 濃度組別分析雙陽性不同的表面抗原和表面抗體濃度組別主要有 3 種，分別是 A 組、D組和 G 組。以低濃度 HBsAb 10.00～100.00 mIU/ml 為主，即(A+D+G)占89.44%(500/559) ； 其 次 為 HBsAg 0.05 ～ 10.00 mIU/ml ， 即 (A+B+C) 占46.87%(262/559)；HBsAg10.00～250.00 mIU/ ml，(D+E+F)占 28.80%(161/559)；HBsAg≥250 mIU/ ml，即(G+H+I)占 24.33%(136/559)。但是高滴度 HBsAb≥1000mI U/ml 所占比例最少，即(C+F+I)僅占 0.36%(2/559)，見圖 2。

HBsAg10.00～250.00 mIU/mL，即(D+E+F)占29.55%；高濃度HBsAg≥250 mIU/mL，即(G+ H +I)占43.18%；高濃度的表面抗體HBsAb≥1 000 mIU/mL，即(C + F + I)沒有在此次實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)，見圖3。圖 3 乙肝表面抗原和抗體雙陽性不同的 HBs Ag 和 HBsAb 濃度組合分析3.5 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果第一輪 PCR 擴(kuò)增片段為 1602bp；第二輪 PCR 擴(kuò)增片段為 836bp，見圖 4。圖 4 乙肝表面抗原和抗體雙陽性 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖圖注：M：Marker(DL2000) 1：第一輪 PCR 片段（S 基因區(qū)） 2：第二輪 PCR 擴(kuò)增（S 基因）3.6 HBV的主要親水區(qū)域(MHR)內(nèi)部的氨基酸突變（附圖1）I組HBsAg(+)/HBsAb(+)和II組HBsAg(+)病毒株的主要親水區(qū)域（MHR）內(nèi)部的氨基酸（aa）突變方面有明顯的差異，I組患者M(jìn)HR的變異數(shù)約為II組患者的7.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2748245