【摘要】：目的:通過對骨關(guān)節(jié)結(jié)核病人外周靜脈血進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)和RT-PCR(reverse transcription Polymerase Chain Reaction)和實時熒光定量PCR檢測巨噬細(xì)胞重組人Toll樣蛋白相互作用蛋白(Recombinant Human Toll Interacting Protein,Tollip)和Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)含量表達(dá)差異,并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。探討Tollip及TLR4含量表達(dá)差異在骨關(guān)節(jié)結(jié)核病人免疫應(yīng)答中的可能作用機(jī)制。方法:選取2017年10月至2019年1月,右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院和百色市人民醫(yī)院收治住院的30例骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者(胸椎結(jié)核11例,腰椎結(jié)核14例,膝關(guān)節(jié)結(jié)核5例);同期選取30例在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院及百色市人民醫(yī)院體檢中心行健康體檢的正常人(正常組)。對兩組分別采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測Tollip蛋白和TLR4蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞技術(shù)檢測Tollip蛋白和TLR4蛋白表達(dá)水平;實時熒光定量PCR檢測巨噬細(xì)胞的Tollip信使核糖核酸(Messenger RibonucleicAcid,mRNA)和TLR4mRNA含量表達(dá)差異。比較兩組間含量表達(dá)差異。結(jié)果:骨關(guān)節(jié)結(jié)核組RT-PCR和實時熒光定量PCR測定TLR4 mRNA和Tollip mRNA結(jié)果為:TLR4 mRNA相對表達(dá)量平均為21.537±0.823,TLR4ΔCt10.622±1.447,Tollip mRNA相對表達(dá)量平均為21.453±1.211,Tollip mRNAΔCt 10.694±1.391。健康體檢組為:TLR4 mRNA相對表達(dá)量平均為21.457±0.470,TLR4ΔCt為10.617±1.389,Tollip mRNA相對表達(dá)量平均為21.573±0.707,Tollip mRNAΔCt 10.452±1.546,算出骨關(guān)節(jié)結(jié)核組與健康體檢組的各項值分別為TLR4 average t=0.462、TLR4ΔCt t=0.014、Tollip average t=0.477、TollipΔCt t=0.637.TLR4 average P=0.646、TLR4ΔCt t=0.989、Tollip average t=0.635、Tollip 1ΔCt t=0.527,其P值均0.05,無統(tǒng)計學(xué)意義。骨關(guān)節(jié)結(jié)核組通過流式細(xì)胞術(shù)檢測TLR4蛋白和Tollip蛋白陽性率的均數(shù)和加減標(biāo)準(zhǔn)差為:TLR4為1.40±0.63、Tollip 5.38±1.99。健康體檢組為:TLR4為0.40±0.26、Tollip 1.40±0.53,TLR4陽性率t為-10.588,Tollip陽性率t為-8.075。TLR4陽性率P值為0.000,Tollip陽性率為0.000,均小于0.05,提示骨關(guān)節(jié)結(jié)核組TLR4蛋白和Tollip蛋白陽性率明顯高于健康體檢組,有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05;骨關(guān)節(jié)結(jié)核組通過細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測TLR4蛋白、Tollip蛋白表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)結(jié)核組中TLR4蛋白數(shù)量較健康體檢組多,同時亮度明顯高于健康體檢組。骨關(guān)節(jié)結(jié)核組中Tollip蛋白和健康體檢組相比數(shù)量較多,亮度也較亮。同樣還發(fā)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)結(jié)核組中TLR4蛋白為高亮度紅色熒光的巨噬細(xì)胞中Tollip蛋白區(qū)域藍(lán)色熒光亮度明顯較暗,而TLR4蛋白為暗亮度紅色熒光的巨噬細(xì)胞中Tollip蛋白區(qū)域藍(lán)色熒光亮度明顯較亮。結(jié)論:本研究揭示骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者在感染結(jié)核后TLR4蛋白和Tollip蛋白表達(dá)可增高。本研究初步探討了骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者外周靜脈血中巨噬細(xì)胞表面TLR4過度異常表達(dá)并可能存在Tollip負(fù)反饋調(diào)控作用的關(guān)系,但其具體作用機(jī)制尚未明確。
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R529.2
【圖文】：

圖 2-1 骨關(guān)節(jié)結(jié)核組與健康體檢組 TLR4 蛋白、Tollip 蛋白二維圖ure 2-1 Two-dimensional map of TLR4 protein and Tollip protein in osteoartictuberculosis group and healthy examination group結(jié)核組通過細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測 TLR4 蛋白、Tollip 蛋白結(jié)果。4 蛋白、Tollip 蛋白表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)結(jié)核組中 TLR4 蛋白數(shù)量較健康時亮度明顯高于健康體檢組。骨關(guān)節(jié)結(jié)核組中 Tollip 蛋白和健康體檢組相亮度也較亮。同樣還發(fā)現(xiàn)骨關(guān)節(jié)結(jié)核組中 TLR4 蛋白為高亮度紅色熒光的ollip 蛋白區(qū)域藍(lán)色熒光亮度明顯較暗，而 TLR4 蛋白為暗亮度紅色熒光的ollip 蛋白區(qū)域藍(lán)色熒光亮度明顯較亮。（隨機(jī)選取兩組成員的免疫熒光技、2-3、2-4、2-5、2-6、2-7）

圖 2-2 骨關(guān)節(jié)結(jié)核組 Tollip 蛋白 （×300）Figure 2-2 Tollip protein in the osteoarticular tuberculosis group（×300）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2742965