【摘要】：背景紅毛癬菌(Trichophyton rubrum,T.rubrum)在真菌感染中占很大比例,紅毛癬菌所致皮膚癬菌病呈現(xiàn)為慢性遷延性、易復發(fā)、難治愈,通常侵襲人類淺表角質結構,但是免疫抑制、外傷等情況下,紅毛癬菌能入侵深部組織結構,造成深部真菌感染。目前真菌感染的治療藥物由于副作用大、療程長,病人依從性差等,治療效果不理想,嚴重影響著病人的工作與生活。研究發(fā)現(xiàn),皮膚中有對抗真菌感染的一系列免疫細胞,如朗格漢斯細胞、巨噬細胞、中性粒細胞、角質形成細胞等。其中角質形成細胞(keratinocyte)能識別抗原、釋放多種抗菌肽、調節(jié)分泌炎癥因子,誘導炎癥反應的發(fā)生,達到防御真菌感染的目的。作為皮膚的第一道防線,角質形成細胞表面有各種模式識別受體(pattern recognition receptors,PRRs),能識別紅毛癬菌表面的細胞壁成分病原體相關分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs),誘導炎癥細胞因子產生,啟動進一步免疫應答。但是相比下,當角質形成細胞與真菌相互識別反應后,真菌本身會發(fā)生什么變化,真菌內部具體的反應機制尚未研究清楚。紅毛癬菌細胞內大量的活性氧(reactive oxygen species,ROS)和一氧化氮(nitric oxide,NO)對細胞的生長和活性有一定的損傷作用,甚至導致真菌細胞死亡。在本研究中,我們主要探究當紅毛癬菌侵襲角質形成細胞時,真菌內部的變化。我們將紅毛癬菌與角質形成細胞混合培養(yǎng),通過檢測相關指標觀察角質形成細胞對紅毛癬菌生長是否有抑制作用,探討ROS和NO對紅毛癬菌的損傷作用。研究目的研究HaCaT細胞對T.rubrum生長的抑制作用并探討其機制,為深入了解皮膚真菌與皮膚屏障之間的關系,進一步認識皮膚真菌感染的免疫機制起了重要作用。方法(1)在合適的條件下培養(yǎng)HaCaT細胞與紅毛癬菌(ATCC4438),實驗分組:T.rubrum,T.rubrum+HaCaT,分別進行選擇合適的濃度比例及時間試驗,確定合適的共孵育濃度比例與時間。(2)通過實驗分組:T.rubrum,T.rubrum+HaCaT,T.rubrum+DPI(NADPH氧化酶抑制劑)+HaCaT,測定真菌活力、ROS、角蛋白酶含量,掃描電鏡和透射電鏡觀察真菌形態(tài)變化。(3)通過實驗分組:T.rubrum,T.rubrum+HaCaT,T.rubrum+L-NMMA(總NOS抑制劑)+HaCaT,測定真菌活力、NO、NOS及角蛋白酶含量,掃描電鏡和透射電鏡觀察真菌形態(tài)變化。(4)通過實驗分組:T.rubrum,T.rubrum+HaCaT,測定真菌ADMA表達。結果(1)檢測真菌生長抑制百分數(shù)后,選定HaCaT細胞:T.rubrum合適濃度比例為4:1,HaCaT細胞與T.rubrum合適共孵育時間為24h,并用于后續(xù)實驗。(2)與HaCaT細胞共孵育后,T.rubrum活力下降,真菌形態(tài)出現(xiàn)損傷,ROS水平增加,角蛋白酶活性降低,DPI能降低HaCaT細胞的抑制作用。(3)與HaCaT細胞共孵育后,T.rubrum活力下降,真菌形態(tài)出現(xiàn)損傷,ADMA表達下降,NOS、NO表達增多,角蛋白酶活性降低,L-NMMA能降低HaCaT細胞的抑制作用。結論(1)T.rubrum與HaCaT細胞共孵育后可能通過產生過量的ROS和NO,導致真菌的損傷,抑制了真菌的活力和侵襲力;(2)NADPH氧化酶和NOS可能是HaCaT細胞抑制T.rubrum生長的靶點;(3)為深入了解皮膚真菌與皮膚屏障之間的關系,進一步認識皮膚真菌感染的免疫機制提供理論基礎。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R756
【圖文】：

廔育２４ｈ后的生長抑制率更明顯，所以我們選擇２４ｈ為Ｔ．邋ｒｕｂｒｕｍ和ＨａＣａＴ細逡逑胞共孵育的合適時間，并用于后續(xù)實驗。逡逑圖２邋Ａ逡逑１２ｈ邐２４ｈ逡逑ｒ邋＇１邐ｒ－逡逑ｇｒｏｕｐ逡逑ｍｍ逡逑Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ邋ｇｒｏｕｐ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＨａＣａＴ邋ｃｅｌｌｓ：邋Ｔ．ｒｕｂｒｕｍ＝４：ｌ）逡逑Ｂ逡逑２２逡逑

再和ＨａＣａＴ細胞共孵育，測得兩組間的真菌活性沒有明顯差異（Ｐ＞０．０５），所逡逑以選擇ＤＰＩ邋１邋（ｉＭ用于后續(xù)實驗。（Ｔ．邋ｒｕｂｒｕｍ組為對照組）逡逑圖３逡逑２３逡逑

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1 史建強;李宇寧;黃文明;;石羔樣毛癬菌引起面部體癬并發(fā)發(fā)際毛囊炎1例[J];湛江醫(yī)學院學報;1989年02期

2 孟楣;王曉玉;吳溪;魏良兵;;抑石膏樣毛癬菌組方的優(yōu)化[J];中國實驗方劑學雜志;2011年12期

3 王曉雯;李亞麗;王紅;陳偉;萬U

本文編號：2739729