【摘要】：目的:分析監(jiān)測試點乙肝的發(fā)病情況,為預(yù)防和控制疫情提供資料;了解河南省監(jiān)測試點乙肝病毒分子流行病學(xué),分析基因型、基因亞型和血清型;發(fā)現(xiàn)乙肝監(jiān)測過程中存在的問題,評價乙肝監(jiān)測試點實施效果,為后續(xù)擴大乙肝監(jiān)測點提供數(shù)據(jù)支撐。方法:分析2012-2017年河南省6個乙肝監(jiān)測點報告的乙肝病例數(shù)據(jù)和附卡信息分地區(qū)、年份、職業(yè)等指標進行描述;并對疑似急性乙肝患者樣本用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附法)進行HBsAg和抗-HBc IgM復(fù)核;采用巢式聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)對HBV的S基因進行擴增,擴增產(chǎn)物經(jīng)電泳檢測后送生物公司測序,測序結(jié)果用ContigExpress軟件進行拼接、編輯和校正,利用Mega6.0中Clustal X軟件,將拼接好的S基因序列與參考毒株序列進行聚類比較,分析HBV基因型、基因亞型和血清型;將HBV MHR區(qū)蛋白與參考序列比對,分析氨基酸突變位點。結(jié)果:監(jiān)測試點報告病例流行病學(xué)分布:2012-2017年,六個監(jiān)測試點共報告乙肝病例28582例,其中CHB 25386例(88.8%,25386/28582),急性乙肝1455例(5.1%,1455/28582),未分類病例1741例(6.1%,1741/28582)。男性18686例(65.4%,18686/28582),女性9896例(34.6%,9896/28582),男女性別構(gòu)成比為1.9:1。2012-2017年河南省總報告發(fā)病率依次為:150.5/10萬、88.8/10萬、76.4/10萬、73.2/10萬、74.0/10萬、80.2/10萬。2012-2013年各地區(qū)報告發(fā)病率均下降,2014-2017年各地區(qū)報告發(fā)病率基本趨于平穩(wěn)。2012-2017年監(jiān)測試點慢性乙肝的報告發(fā)病率遠高于急性乙肝。25-30歲年齡組報告發(fā)病率最高。男性報告發(fā)病率大于女性。報告病例職業(yè)前五名分別是:農(nóng)民、家務(wù)及其待業(yè)、工人、離退人員、商業(yè)服務(wù);其中農(nóng)民占比63.7%。HBV分子流行病學(xué):有126例樣本成功擴增并測序,其中B基因型17例(13.5%),C基因型109例(86.5%)。B1亞型占比0.8%,B2亞型占比12.7%,C1占比11.9%,C2占比74.6%。adrq+血清型有105例,占比83.3%;adw2血清型有21例,占比16.7%。126例毒株中有64例發(fā)生了MHR區(qū)突變,突變率50.8%。HBV突變氨基酸位點相對較多,有113、117、122、123、124、126、131、133、147、160、163、164、168、169位氨基酸。其中126位氨基酸突變率最高為35.7%。乙肝監(jiān)測試點實施效果評價:(1)與2011年相比,2012-2017年“HBsAg陽性時間”的未填寫率逐年降低(依次為:97.8%、2.8%、0.3%、0.2%、0.1%、0)。但是臨床的一些檢測指標檢測率依然偏低,“抗-HBc IgM 1:1000檢測結(jié)果”的未測比例為81.1%,“恢復(fù)期血清HBsAg陰轉(zhuǎn)、抗HBs陽轉(zhuǎn)”的未測率為99.1%。2017年“本次ALT(U/L)”和“抗-HBc IgM 1:1000檢測結(jié)果”的未填寫率逐年降低為0。(2)2011年未分類病例為6775例,占2011年報告病例總數(shù)的百分比為39.0%;2012年未分類病例為1741例,占2012年報告病例總數(shù)的百分比為13.9%;2012年較2011年報告病例未分類比例下降25.1%。從2013年沒有未分類病例。(3)2013-2017年急性乙肝的復(fù)核一致率均大于80.0%。結(jié)論:1.乙肝監(jiān)測試點報告乙肝發(fā)病率逐漸降低。慢性乙肝的發(fā)病率大于急性乙肝的發(fā)病率。男性報告發(fā)病率大于女性。25-30歲年齡組報告發(fā)病率最高。2.河南省HBV血清型:adrq+為主,adw2次之;基因型:C為主,B次之;基因亞型:B1、B2和C1、C2,B2、C2為主。多個HBV MHR區(qū)域發(fā)生突變,其中突變率最高的位點為126氨基酸。3.報告卡填寫完整率提高,需提升乙肝實驗室檢測能力。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R512.62;R181.3
【圖文】：

并參照附卡流行病學(xué)信息，依據(jù)乙型肝炎診斷標準（WS299-2008）和乙肝監(jiān)測點病例報告工作流程圖（圖2.1）進行急慢性乙肝病例的分類，并與傳染病報告系統(tǒng)病例的分類進行比對。急性乙肝的復(fù)核一致率=復(fù)核后為急性乙肝的病例數(shù)/傳染病報告系統(tǒng)病例分類為急性乙肝的病例數(shù)×100%。2.3.1 技術(shù)路線圖 2. 1 乙肝監(jiān)測試點病例報告工作流程圖

圖 2. 2 實驗技術(shù)路線2.3.2 ELISA 法復(fù)核血樣血清學(xué)指標 HBsAg、HBeAg 和 HBc-IgM2.3.2.1 實驗前準備血樣整理：按年份整理血樣，根據(jù)血樣剩余量的多少進行分類，選取部分血量相對充足的樣本重新編號，按照滿足實驗需求的樣本數(shù)估計實驗試劑需求量，安排試驗計劃。樣品準備：實驗前將待測血標本從 70℃冰箱中取出解凍，并將解凍后的樣本按照順序依次分裝試驗所需量儲存；實驗前一晚將試劑盒從 20℃移動至 4℃冰箱，實驗當天從冰箱中取出，平衡至室溫待用；打開洗板機預(yù)洗并調(diào)試確保洗板機每一孔都能清洗到位，酶標儀開機備用。2.3.2.2 實驗操作

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