【摘要】：目的血吸蟲(chóng)病是一種嚴(yán)重的寄生蟲(chóng)病,雖然目前針對(duì)日本血吸蟲(chóng)造成的肝損傷研究較多,針對(duì)血吸蟲(chóng)致肝臟纖維化的機(jī)制仍有待深入了解。JQ-1是一種小分子抑制劑,其在抗腫瘤療效方面取得了較好的效果,并且有較好的抑制炎癥作用。我們主要是想研究JQ-1能否對(duì)血吸蟲(chóng)導(dǎo)致的肝臟纖維化有治療效果,以及探討其可能存在的新機(jī)制。方法用18±2條日本血吸蟲(chóng)尾蚴感染C67/BL6小鼠,分為實(shí)驗(yàn)組以及對(duì)照組,每組8只。對(duì)于肉芽腫模型,我們?cè)诘?周分別對(duì)兩組小鼠進(jìn)行腹腔注射JQ-1(實(shí)驗(yàn)組50mg/kg/d)和10%β-環(huán)糊精(對(duì)照組),持續(xù)2周,最后一次給藥后24h處死小鼠。用HE法檢測(cè)小鼠肝臟肉芽腫面積大小;并對(duì)肝臟轉(zhuǎn)氨酶進(jìn)行檢測(cè);q PCR對(duì)相關(guān)炎癥因子進(jìn)行定量檢測(cè)。對(duì)于纖維化模型,我們?cè)诘?周對(duì)小鼠進(jìn)行口服吡喹酮?dú)⑾x(chóng)處理,然后在第7周分別對(duì)兩組小鼠進(jìn)行腹腔注射JQ-1(實(shí)驗(yàn)組50mg/kg/d)和10%β-環(huán)糊精(對(duì)照組),持續(xù)2周,最后一次給藥后24h處死小鼠。用天狼星紅染色檢測(cè)小鼠肝臟纖維化面積大小;對(duì)肝臟生化指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè);q PCR檢測(cè)肝臟α-SMA以及膠原m RNA表達(dá)量;部分肝臟送公司進(jìn)行m RNA的測(cè)序分析;q PCR對(duì)m RNA測(cè)序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證分析。在細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)方面,我們通過(guò)JQ-1(500n M)對(duì)JS-1細(xì)胞進(jìn)行處理,用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞的活性、增殖、凋亡及衰老;q PCR檢測(cè)處理前后細(xì)胞α-SMA以及膠原m RNA表達(dá)量;Western-blot檢測(cè)處理后細(xì)胞STAT3以及p-STAT3的蛋白表達(dá)量。結(jié)果在肝臟肉芽腫模型中,JQ-1處理組肝臟肉芽腫面積明顯減少,肝臟肉芽腫程度明顯減輕。通過(guò)對(duì)相關(guān)炎癥因子的定量分析可知,JQ-1可以減少相關(guān)炎癥因子的表達(dá);在肝臟纖維化模型中,JQ-1處理組肝臟纖維化面積明顯減小,肝功能相關(guān)檢測(cè)也得到明顯改善,α-SMA以及膠原m RNA的定量分析表明JQ-1處理可以抑制肝臟中星狀細(xì)胞的活化使膠原的表達(dá)量降低。送公司m RNA測(cè)序結(jié)果顯示JQ-1處理后有350個(gè)差異表達(dá)基因,其中164個(gè)基因上調(diào),186個(gè)基因下調(diào)。GO分析可以看出,JQ-1可以影響已知在HSC轉(zhuǎn)分化成肌成纖維細(xì)胞和肝纖維化中發(fā)揮關(guān)鍵作用的廣譜生物學(xué)過(guò)程和細(xì)胞組分的表達(dá)。這些組分包括細(xì)胞外區(qū)域,細(xì)胞外基質(zhì),細(xì)胞外區(qū)域部分,受體活性,調(diào)節(jié)離子運(yùn)輸,脂質(zhì)代謝過(guò)程以及整合途徑。KEGG分析顯示高度富集代謝通路主要集中于異生素生物降解和新陳代謝、脂質(zhì)代謝、癌癥、輔因子和維生素的代謝、內(nèi)分泌和代謝疾病以及碳水化合物代謝等6個(gè)方面。用q PCR對(duì)測(cè)序結(jié)果鑒定分析顯示出一定的一致性,表明測(cè)序的可靠性較高;細(xì)胞學(xué)方面的研究顯示JQ-1處理小鼠肝臟星狀細(xì)胞系JS-1可以抑制其增殖,但是對(duì)JS-1的活性、衰老、凋亡都沒(méi)有影響。Western-blot檢測(cè)處理后細(xì)胞STAT3以及p-STAT3的蛋白表達(dá)量,結(jié)果顯示JQ-1可以抑制p-STAT3的表達(dá)。結(jié)論JQ-1可以緩解由日本血吸蟲(chóng)感染導(dǎo)致的肝臟肉芽腫及纖維化,在血吸蟲(chóng)感染前期階段主要通過(guò)抑制各類(lèi)促炎因子的表達(dá)緩解肉芽腫癥狀。在感染后期導(dǎo)致的纖維化治療中,它可以抑制JAK2/STAT3通路中STAT3的磷酸化從而抑制肝臟星狀細(xì)胞的激活,導(dǎo)致纖維化程度的降低。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R532.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2722160