【摘要】：目的:本實驗以羊源細粒棘球蚴原頭蚴為實驗材料,通過體外長期培養(yǎng)建立穩(wěn)定的細粒棘球蚴原頭蚴體外成囊培養(yǎng)模型,觀察膽汁及大腸桿菌對細粒棘球蚴原頭蚴及囊泡生長發(fā)育的作用,并進一步探討膽瘺及感染因素對囊型肝包蟲病自然病程的影響。方法:(1)從感染囊型包蟲病的羊肝臟病灶中提取新鮮的細粒棘球蚴原頭蚴,消化處理后伊紅染色檢測原頭蚴活力,計算總數(shù)確定培養(yǎng)密度,在37℃、5%CO_2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)于含20%血清的以RPMI-1640為主的培養(yǎng)基中。在體外連續(xù)培養(yǎng)的過程中,隨機取適量樣品于倒置顯微鏡下觀察,拍照記錄原頭蚴隨培養(yǎng)時間的形態(tài)學變化,觀察總結(jié)原頭蚴體外培養(yǎng)生長發(fā)育規(guī)律。(2)分別將低濃度的膽汁及大腸桿菌菌液作用于體外培養(yǎng)的細粒棘球蚴原頭蚴及其囊泡,光學顯微鏡下觀察原頭蚴及囊泡在作用的不同時間點的形態(tài)學變化;在電子顯微鏡下觀察原頭蚴及其囊泡的微觀結(jié)構(gòu)改變,并進行HE染色觀察其組織病理學改變。結(jié)果:(1)體外培養(yǎng)原頭蚴在第1周開始形成蒂端發(fā)泡,在體外培養(yǎng)的前6周,原頭蚴的形態(tài)學以蒂端發(fā)泡為主要變化特征,其數(shù)量逐漸增加,體積逐漸增大。在第6周可觀察到原頭蚴外周形成一層角質(zhì)層,其開始向成囊方向發(fā)育;原頭蚴的體積隨培養(yǎng)時間的延長逐漸增大,觀察到最大囊的直徑約為:1.2mm,在體外培養(yǎng)的第17周部分原頭蚴囊外周的角質(zhì)層開始變得毛糙,囊的體積縮小,其內(nèi)部結(jié)構(gòu)變得模糊不清,濃縮聚集成團,與外周的角質(zhì)層有明顯的界限,培養(yǎng)至7個月時,90%以上的囊泡出現(xiàn)上述形態(tài)學改變;原頭蚴的最大成囊率約為11%。(2)低濃度膽汁作用原頭蚴后,膽汁并沒有直接在短時間內(nèi)將原頭蚴殺滅,此時原頭蚴的活動度增加,外翻,隨著培養(yǎng)時間的延長其周圍也逐漸形成一層折光率較高的角質(zhì)層,但其生長發(fā)育的速度明顯低于同期對照組中的原頭蚴,隨作用時間的延長,膽汁作用組中的原頭蚴的生長逐漸停滯,內(nèi)部結(jié)構(gòu)模糊不清,逐漸走向死亡。大腸桿菌作用原頭蚴后,在作用48h時,幾乎所有的原頭蚴都失去正常形態(tài),頭鉤散落,體積縮小;伊紅染色也證實所有原頭蚴都已失去活性,出現(xiàn)了快速死亡。膽汁及大腸桿菌作用于原頭蚴囊泡的實驗中觀察到兩組囊泡的形態(tài)結(jié)構(gòu)較對照組出現(xiàn)了明顯的變化,大部分囊泡出現(xiàn)了不同程度的皺縮,其外周角質(zhì)層損害嚴重,內(nèi)部結(jié)構(gòu)固縮,出現(xiàn)角質(zhì)層與生發(fā)層分離的現(xiàn)象,作用后囊泡的透射電鏡結(jié)果和HE染色也證實了囊泡的膜結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的破壞。結(jié)論:1成功建立體外培養(yǎng)細粒棘球蚴原頭蚴成囊模型,體外培養(yǎng)原頭蚴的體積隨培養(yǎng)時間的延長存在從小到大再逐漸縮小的變化規(guī)律。2膽汁對原頭蚴的生長發(fā)育具有抑制作用,大腸桿菌可使原頭蚴及其囊泡快速死亡,且二者均能使囊泡膜結(jié)構(gòu)的完整性被破壞,促進了包蟲的老化死亡。3膽瘺和細菌感染是囊型肝包蟲自然病程發(fā)生改變的重要影響因素,促進了包蟲囊腫的死亡。
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R532.32
【圖文】：

圖 1-1.體外培養(yǎng)原頭蚴隨時間其形態(tài)學變化規(guī)律（5×10）。a、b、c、d、e、f、g、h 分別為體外培原頭蚴第 0 天、1 個月、2 個月、3 個月、4 個月、5 個月、6 個月、7 個月時的形態(tài)學變化。Fig 1-1 The morphological changes of protoscolex cultured in vitro over time （5×10）. a, b, c d, e, f, g, hrepresent the morphological changes of protoscolex at the first day, the first month, the second month, thethird month, the fourth month, the fifth month, the sixth month and the seventh month respectively.3.2 體外培養(yǎng)原頭蚴蒂端發(fā)泡的形成在體外培養(yǎng)的前六周，原頭蚴的形態(tài)主要以蒂端發(fā)泡的形成及其體積的增大為主要變化特征（見圖1-2），可見原頭蚴隨培養(yǎng)時間的延長蒂端發(fā)泡的形成逐漸增加，同時蒂端發(fā)泡的體積也隨培養(yǎng)時間的延長逐漸增大，蒂端發(fā)泡的體積可超過原頭蚴本身的體積數(shù)倍。此時原頭蚴的活動度和外翻原頭蚴的數(shù)量增加。從培養(yǎng)的第五周開始可見原頭蚴的體積逐漸增大，且其進一步變得透明，體內(nèi)的鈣顆粒消失，外周形成折光率較高的角質(zhì)層。細粒棘球蚴原頭蚴體外培養(yǎng)蒂端發(fā)泡形成率隨培養(yǎng)時間的延長逐漸增加，在體外培養(yǎng)的第5周蒂端發(fā)泡的形成率達95%，其后未見增加，后期隨著培養(yǎng)時間的延長蒂端發(fā)泡形成率逐漸減少，原頭蚴的蒂端發(fā)泡逐漸消失，原頭蚴開始向成囊方向發(fā)育（如圖1-3所示）。

1-3. 體外培養(yǎng)原頭蚴前期蒂端發(fā)泡形成率隨時間變化規(guī)ity of the formation rate of the vesicle at pedicle end of protoscover time in the first six weeks頭蚴發(fā)育成囊過程中幾種不同的形態(tài)過程中觀察到原頭蚴在向成囊方向發(fā)育的過程中可過自身不斷膨大，然后周圍形成一層角質(zhì)層，體積有部分原頭蚴是尾部膨大而頭部未見增大，或者是如圖1-4 c,d箭頭所示）。還有部分原頭蚴蒂端發(fā)泡其體積是原頭蚴體積的數(shù)倍（見圖1-4b,e），后逐g,h)，此種形態(tài)在原頭蚴體外培養(yǎng)的早期較常見。

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本文編號：2721375