【摘要】：慢性乙肝病毒(HBV)感染可導(dǎo)致肝臟纖維化,肝硬化,最終發(fā)展成為肝癌。病毒學(xué)家將HBV致癌歸因于病毒DNA的整合以及調(diào)節(jié)蛋白HBx的致癌作用,但是越來越多的研究表明HBV病毒是非細(xì)胞病變的病毒，HBV介導(dǎo)肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)生的主要原因是機(jī)體免疫系統(tǒng)在清除HBV過程中對感染HBV的肝細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答造成了肝臟損傷,持續(xù)的肝臟損傷導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。肝臟是一個(gè)特殊的免疫耐受器官,肝臟中的免疫細(xì)胞主要呈現(xiàn)出免疫耐受狀態(tài)。臨床上的乙肝攜帶者,以及HBV轉(zhuǎn)基因小鼠中,肝臟中CD8+T細(xì)胞由于高表達(dá)抑制性受體而處于免疫抑制狀態(tài),并無肝臟損傷產(chǎn)生;而當(dāng)肝臟免疫耐受環(huán)境被打破,免疫細(xì)胞被激活,其在清除病毒的過程中引起的免疫應(yīng)答能導(dǎo)致肝臟炎癥的發(fā)生。在腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn),共抑制性受體TIGIT(T cell immunoglobulin and immune receptor tyrosine-based inhibitory motif domain)是 CD4+ T 細(xì)胞和 CD 8+ T 細(xì)胞耗竭的標(biāo)志。其次,TIGIT分子也高表達(dá)于活化的T細(xì)胞表面,當(dāng)與抗原呈遞細(xì)胞上的配體CD155結(jié)合后能抑制T細(xì)胞的功能。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肝臟T細(xì)胞高表達(dá)TIGIT分子。TIGIT分子在HBV免疫耐受的維持中是否發(fā)揮了重要作用?阻斷TIGIT通路是否可以打破HBV耐受,進(jìn)而導(dǎo)致肝癌的發(fā)生?為此我們進(jìn)行了深入探討,取得的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1 HBs-tg小鼠TIGIT阻斷或缺失誘發(fā)慢性肝炎對HBs-tg小鼠TIGIT阻斷后,小鼠肝臟出現(xiàn)持續(xù)性谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高的現(xiàn)象:肝臟病理染色可以看出血管附近有大量白細(xì)胞浸潤;天狼星紅染色可以看出肝臟出現(xiàn)了一定的纖維化;TUNEL染色顯示TIGIT阻斷后,HBs-tg小鼠肝臟中凋亡細(xì)胞比例上升。此外,HBs-tgTIGIT-/-小鼠出現(xiàn)自發(fā)的慢性肝炎。2 HBs-tg小鼠TIGIT阻斷或缺失聯(lián)合疫苗免疫誘發(fā)肝細(xì)胞癌在TIGIT阻斷3個(gè)月后,對該小鼠進(jìn)行HBsAg疫苗免疫,約有63.64%的HBs-tg小鼠在免疫后2個(gè)月產(chǎn)生肝細(xì)胞癌。直接對HBs-tgTigit-/-小鼠進(jìn)行HBsAg疫苗免疫,有61.54%比例的小鼠產(chǎn)生肝細(xì)胞癌。3 HBs-tg小鼠隨年齡增長肝臟CD8+ T細(xì)胞TIGIT表達(dá)升高通過流式細(xì)胞術(shù)分析2個(gè)月(m),6m，10m的HBs-tg小鼠和野生型小鼠(WT)肝臟和脾臟中CD8+T細(xì)胞的抑制性分子表達(dá),我們發(fā)現(xiàn)HBs-tg小鼠肝臟中CD8+T表達(dá)TIGIT水平顯著高于WT小鼠,且隨著年齡增長,TIGIT表達(dá)升高,而脾臟中CD8+T細(xì)胞TIGIT表達(dá)不變。PD-1表達(dá)也具有相同的趨勢,即HBs-tg小鼠肝臟CD8+ T隨著年齡增長逐漸上調(diào)PD-1分子的表達(dá),且顯著高于WT小鼠。4TIGIT阻斷后HBs-tg小鼠肝臟中CD8+T細(xì)胞數(shù)目增多,活化增強(qiáng),并出現(xiàn)抗原特異性CTLsTIGIT阻斷后,HBs-tg小鼠肝臟中T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞比例和數(shù)目顯著高于對照小鼠,且出現(xiàn)了一群抗原特異性CD8+細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTLs)。進(jìn)一步流式分析顯示,TIGIT阻斷后,肝臟CD8+T細(xì)胞活化增強(qiáng),表現(xiàn)為CD69表達(dá)升高,且CD44hiCD62Llow比例升高,CD127+CD62L+中心記憶性T細(xì)胞比例減少,提示抗原刺激后,中心記憶性CD8+ T細(xì)胞分化成效應(yīng)性T細(xì)胞,參與免疫應(yīng)答。此外,CD8+T細(xì)胞分泌IFN-γ和CD107a水平升高。HBs-tg Tigit-/-小鼠相比于同窩對照的HBs-tg小鼠,其肝臟CD8+ T細(xì)胞分泌IFN-γ水平顯著升高。5清除CD8+ T細(xì)胞的HBs-tg小鼠阻斷TIGIT肝損傷明顯減輕對HBs-tg小鼠清除CD8+T細(xì)胞后,再對其進(jìn)行TIGIT阻斷,則ALT不再升高,病理染色顯示肝臟中炎性浸潤明顯減少。若對TIGIT阻斷后的HBs-tg小鼠在疫苗免疫期間清除CD8+T細(xì)胞,則不會發(fā)展成為肝癌。結(jié)論:HBs-tg小鼠中CD8+ T細(xì)胞表面高表達(dá)的TIGIT分子,維持了肝臟對HBV的免疫耐受,若阻斷TIGIT通路,肝臟免疫耐受環(huán)境打破,CD8+T細(xì)胞活化水平提高,分泌細(xì)胞因子水平和殺傷功能明顯增強(qiáng),進(jìn)而攻擊病毒感染的肝細(xì)胞,導(dǎo)致肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的損傷和凋亡,使肝臟產(chǎn)生慢性炎癥,長期的慢性炎癥促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的發(fā)生。
【圖文】：

圖１．邋１殺傷性ＣＤ８＋Ｔ細(xì)胞介導(dǎo)肝炎和病毒清除的機(jī)制（引自ＧｕｉｄｏｔｔｉａｎｄＣｈｉｓａｒｉ，逡逑２００６）逡逑圖注：ＨＢＶ抗原特異性ＣＴＬｓ通過Ｆａｓ邋Ｌ和穿孔素介導(dǎo)的方式來殺傷肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞。ＨＢＶ抗逡逑原特異性ＣＴＬｓ分泌抗病毒的細(xì)胞因子來抑制病毒的復(fù)制，以一種非細(xì)胞病變的方逡逑式。并且活化肝臟中實(shí)質(zhì)細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞來分泌趨化Ｈ子。逡逑輔助性Ｔ細(xì)胞（ＣＤ４＋邋Ｔ－ｈｅｌｐｅｒ邋ｃｅｌｌｓ）則主要是通過促進(jìn)病毒特異性ＣＤ８＋邋Ｔ逡逑細(xì)胞的產(chǎn)生和維持穩(wěn)態(tài)來參與抗病毒的過程。與此猜測一致的是，研究發(fā)現(xiàn)人和逡逑黑猩猩中，ＨＢＶ或者ＨＣＶ特異性ＣＤ４＋邋Ｔ細(xì)胞應(yīng)答的強(qiáng)度和ＣＤ８＋邋Ｔ細(xì)胞應(yīng)答逡逑強(qiáng)度相關(guān)（Ｃｈｉｓａｒｉ邋ａｎｄ邋Ｆｅｒｒａｒｉ，邋１９９５；邋Ｓｈｏｕｋｒｙ邋ｅｔ邋ａｌ．，２００４ａ）。盡管有體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，逡逑輔助性Ｔ細(xì)胞有殺傷能力，但是他們在病毒感染過程中致病作用的研究卻不清逡逑楚。此外也有研究發(fā)現(xiàn)，在急性ＨＢＶ感染的黑猩猩中，在病毒血癥發(fā)生的頂峰逡逑時(shí)清除0４＋丁細(xì)胞并不能減輕肝損傷（�。保必保保保保ⅲ蓿叮保池玻埃埃常�。以上結(jié)果說明，曰８NB逡逑和ＨＣＶ感染中，病毒特異性ＣＤ４＋Ｔ細(xì)胞可能并不是直接介導(dǎo)肝損傷。他們更逡逑

圖１．邋２肝臟中的免疫細(xì)胞（引自Ｒａｃａｎｅｌｌｉ邋ａｎｄ邋Ｒｅｈｅｒｍａｎｎ，邋２００６）逡逑圖注：Ｂ，Ｂ細(xì)胞；ＤＣ，樹突狀細(xì)胞；ＨＳＣ，肝臟星形細(xì)胞；ＫＣ，肝臟巨噬細(xì)胞；ＮＫ，自然逡逑殺傷細(xì)胞；Ｔ，邋Ｔ細(xì)胞。逡逑ＮＫ細(xì)胞可以通過他們的活化性受體和抑制性受體來平衡促炎性細(xì)胞因子逡逑（Ｔｈｌ）和抗炎性細(xì)胞因子（Ｔｈ２）的產(chǎn)生來調(diào)節(jié)肝臟損傷。在抑制性信號缺失和逡逑Ｉ型干擾素及其誘導(dǎo)產(chǎn)生的ＣＣＬ３存在的情況下，，ＮＫ細(xì)胞活化性受體與配體相結(jié)逡逑合，導(dǎo)致ＮＫ細(xì)胞活化并且靶細(xì)胞被裂解（Ｓａｌａｚａｒ－Ｍａｔｈｅｒｅｔａｌ．，１９９８）。ＮＫ細(xì)胞活逡逑化的情況下也會大量分泌ＩＦＮ－丫，而ＩＦＮ－ｙ能刺激肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞分泌逡逑趨化因子ＣＸＣＬ９，接著招募Ｔ細(xì)胞進(jìn)入肝臟（Ｉｔｏｈｅｔａｌ．，邋２００１）。ＮＫＴ細(xì)胞可以識逡逑別脂質(zhì)抗原和分歧桿菌細(xì)胞壁上的糖脂類組成成分。該識別是由肝細(xì)胞或者抗原逡逑呈遞細(xì)胞，例如巨噬細(xì)胞，ＤＣ細(xì)胞和Ｂ細(xì)胞上的ＣＤ１分子所介導(dǎo)的（Ｂｅｎｄｅｌａｃｅｔ逡逑ａｌ，，１９９５；Ｃａｍａｕｄｅｔａｌ．，１９９９）。ＤＣ細(xì)胞，Ｋｕｆｆｅｒ細(xì)胞分泌的ＩＬ－１２可以促進(jìn)ＮＫＴ細(xì)逡逑胞的活化，進(jìn)而使ＮＫＴ細(xì)胞介導(dǎo)Ｆａｓ依賴的細(xì)胞裂解（Ｂｅｎｄｅｌａｃｅｔａｌ．，１９９７）。這種逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R512.62;R735.7

【相似文獻(xiàn)】

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1 繆曉輝,向曉星;肝臟免疫耐受機(jī)制[J];肝臟;2001年02期

2 楊t熁

本文編號：2694354