【摘要】：目的:探討雙特異性磷酸酶3(dual specificity phosphatase 3,DUSP3)、二磷酸腺苷核糖化因子鳥(niǎo)苷酸激酶1(Arf GAP with SH3 domain,ankyrin repeat and PH domain1,ASAP1)、鳥(niǎo)苷酸結(jié)合蛋白5(guanylate binding protein 5,GBP5)基因在肺結(jié)核患者及潛伏結(jié)核感染人群中的表達(dá)情況。通過(guò)DUSP3、ASAP1、GBP5基因在肺結(jié)核患者和潛伏結(jié)核感染人群的表達(dá),探討確診結(jié)核患者、結(jié)核潛伏感染人群及非結(jié)核人群之間基因表達(dá)的差異,有針對(duì)性的對(duì)不同群體制定不同的預(yù)防、診療方案。方法:選取青島大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科和青島市黃島區(qū)結(jié)核病醫(yī)院2016年8月至2017年5月就診的患者及這期間青島大學(xué)附屬醫(yī)院健康體檢中心健康體檢人員為研究對(duì)象。以痰涂片是否找到結(jié)核分枝桿菌((Mycobacterium tuberculosis,MTB)和γ-干擾素釋放試驗(yàn)(IGRAs)為標(biāo)準(zhǔn),將符合條件的研究對(duì)象分為3組,其中確診肺結(jié)核組40例,結(jié)核潛伏感染組40例,健康對(duì)照組40例。用肝素鋰抗凝試管抽取這三組受試者的外周靜脈血3ml,提取血液里的人外周血單個(gè)核細(xì)胞,然后提取其中的RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成c DNA,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)檢測(cè)這三組人群基因表達(dá)情況,比較這3個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)量2-△△Ct。數(shù)據(jù)分析前用SPSS軟件檢驗(yàn)方差齊性,P0.05,表示方差齊。3組人群年齡用x±s表示。應(yīng)用Graph Pad Prim 5.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,兩組均數(shù)間應(yīng)用t檢驗(yàn)比較,三組均數(shù)間用方差分析比較,P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:GBP5基因在3組受試者中的基因表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.23 P=0.001)。確診肺結(jié)核組基因相對(duì)表達(dá)量(1.58±0.80)顯著高于潛伏感染組(1.09±0.68),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.93,P=0.004),確診肺結(jié)核組基因相對(duì)表達(dá)量(1.58±0.80)顯著高于健康對(duì)照組(1.04±0.61),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.40,P0.01)。潛伏感染組(1.09±0.68)與健康對(duì)照組(1.04±0.61)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.39,P=0.70)。DUSP3基因在3組受試者中的基因表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2.21 P=0.11)。ASAP1基因在3組受試者中的基因表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.26 P=0.77)。結(jié)論:1.GBP5基因在肺結(jié)核確診組、結(jié)核潛伏感染組、健康對(duì)照組表達(dá)存在差異性。2.DUSP3基因在三組人群中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是不排除樣本量小,存在誤差的可能。3.ASAP1基因在三組人群中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是不排除樣本量小,存在誤差的可能。4.GBP5基因在結(jié)核病患者、結(jié)核潛伏感染人群、健康人群中的基因表達(dá)存在不同。GBP5基因可以篩選結(jié)核患者,其對(duì)結(jié)核病的診治和預(yù)防具有重要的指導(dǎo)意義。對(duì)于潛伏結(jié)核感染人群,未證實(shí)其與健康對(duì)照組人群表達(dá)的差異性。
【圖文】：

注：ABC 分別為 DUSP3、ASAP1、GBP5 的溶解曲線(xiàn)。其中橫坐標(biāo)代表溫度，縱坐標(biāo)為將熒光強(qiáng)度的變化對(duì)溫度變化的求導(dǎo)。圖 1 引物的溶解曲線(xiàn)5.DUSP3、ASAP1、GBP5 基因的擴(kuò)增曲線(xiàn)DUSP3、ASAP1、GBP5 的擴(kuò)增曲線(xiàn)曲線(xiàn)均平滑且穩(wěn)定，，曲線(xiàn)形狀較完好，符合定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果可信。由擴(kuò)增曲線(xiàn)可以得出 Ct 值，根據(jù) Ct 值，計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量 2-△△Ct。見(jiàn)圖 2。

23注：ABC 分別為 DUSP3、ASAP1、GBP5 基因的擴(kuò)增曲線(xiàn)。其中橫坐標(biāo)代表 Ct 值，指每個(gè)反管內(nèi)熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定范圍時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)；縱坐標(biāo)代表相對(duì)熒光量。圖 2 DUSP3、ASAP1、GBP5 基因的擴(kuò)增曲線(xiàn)
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2693755