【摘要】：慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染引起的疾病。早在20世紀70年代,就有學者發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝細胞癌(HCC)與慢性乙型肝炎病毒感染有關。目前診斷慢性乙肝相關性肝細胞癌的生物標志物在臨床上的檢測準確性不高,需要更多新的研究來發(fā)現(xiàn)可以用于早期檢測的新的生物標志物。乙型肝炎病毒感染引起的原發(fā)性肝細胞癌關聯(lián)多種基因,轉錄本和蛋白質的彼此作用及調控。通過篩選HBV相關性肝癌樞紐基因,進一步探究它們是否可以作為一種生物標志物來特異性的檢測肝細胞癌的發(fā)展階段。在實際應用方面,這些樞紐基因可以作為新的生物標志物或藥物作用靶點,有助于HCC的早期診斷或治療。前期已經通過生物信息學方法篩選出了一些HBV相關性肝癌樞紐基因,并從中選出了有明顯上下調變化的兩種樞紐基因BOP1和PEBP4,從理論意義上來說,這兩個基因與肝細胞癌的發(fā)生與發(fā)展有一定關系。選取肝細胞癌細胞HepG2作為研究對象,通過研究基因表達水平變化對肝癌細胞HepG2的影響,從而初步確定它們與HBV相關性肝癌的關系。通過本課題的研究,成功構建了基因BOP1和PEBP4的真核過表達質粒pcDNA3.1-BOP1和pcDNA3.1-PEBP4以及干擾質粒shBOP1和shPEBP4,并成功轉染入HepG2細胞,實現(xiàn)了基因mRNA水平和蛋白水平的改變。轉染72h后檢測基因mRNA水平的表達量。其中,轉染過表達質粒pcDNA3.1-BOP1實驗組基因BOP1的mRNA表達水平上調了8倍,轉染干擾質粒shBOP1實驗組基因BOP1的mRNA表達水平下調了0.8倍;轉染過表達質粒pcDNA3.1-PEBP4實驗組基因PEBP4的mRNA表達水平上調了15倍,轉染干擾質粒shPEBP4實驗組基因PEBP4的mRNA表達水平下調了0.9倍。進一步研究了基因表達水平的變化對HepG2細胞行為學的影響。結果表明,過表達基因BOP1促進HepG2細胞的增殖和遷移,而干擾基因BOP1表達則對HepG2細胞的增殖和遷移有抑制作用;過表達基因PEBP4促進了HepG2細胞的增殖,在轉染48h后,對HepG2細胞遷移開始有促進作用,干擾PEBP4表達則抑制了HepG2細胞的增殖和遷移。干擾基因BOP1和PEBP4的表達對HepG2細胞的凋亡有促進作用。
【圖文】：

形態(tài)及結構毒科（Hepadnaviridae）包括 2 個屬，人乙型肝炎 DNA 病毒屬的代表種。嗜肝 DNA 病毒的特征：內部含有部分雙鏈 DNA。②具有逆轉錄功能聚合（HBsAg）。④嗜肝性。粒在電子顯微鏡下有三種不同的形態(tài)：，是一種完整的 HBV 病毒粒子，由外膜和核衣殼，為脂蛋白結構，約含 25%磷脂和 75%的糖蛋白主要是乙肝表面抗原（HBsAg），分別是 S 抗原、p一起組成了外膜上 L、M、S 三種病毒蛋白形式[1的部分雙鏈 DNA。衣殼由病毒核心蛋白（HBc）裹著病毒聚合酶，基因組以及一些宿主細胞蛋白[2

圖 1.2 小球形顆粒模式圖igure1.2 Structure of the virio示：圖 1.3 管型顆粒模式圖ure1.3 Structure of the virion的兩條 DNA 鏈組成，長約′端無共價鏈接，而是與 HB
【學位授予單位】：湖北工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R512.62;R735.7

【參考文獻】

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本文編號：2688721