本文關鍵詞：干擾素-γ釋放方法評價成人VZV特異性細胞免疫效果，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：水痘-帶狀皰疹病毒(varicella-zoster virus, VZV)是水痘和帶狀皰疹的致病病原體,在兒童初次感染引起水痘,恢復后病毒潛伏在體內(nèi),少數(shù)病人在成人后病毒再激活而引起帶狀皰疹。目前我國水痘的真實發(fā)病率很高,是突發(fā)公共衛(wèi)生事件的主要原因之一。帶狀皰疹的發(fā)生與VZV特異性細胞免疫水平密切相關,當免疫水平下降時,VZV被激活而發(fā)生帶狀皰疹。目前針對水痘和帶狀皰疹的治療均無法完全清除體內(nèi)病毒,而疫苗的接種可以有效的預防這兩種疾病。隨著水痘疫苗接種人數(shù)的增多和帶狀皰疹疫苗的推廣應用,迫切需要建立一種簡便、快速、準確的方法評價疫苗的細胞免疫效果,評價成人的VZV特異性CMI,判斷其是否為易感人群,是否需接種疫苗預防帶狀皰疹。目前免疫學中檢測VZV特異性細胞免疫應答的方法主要有細胞內(nèi)細胞因子染色法、皮膚試驗、IFN-γ Eli spot和IFN-γ釋放試驗,前三者分別存在靈敏度低、實驗室無法實施和操作繁瑣等缺點,而且都不能定量。近年發(fā)展的基于ELISA的IFN-γ釋放試驗正逐漸被認可,已應用于TB/LTB的診斷并且有相關商品化試劑盒批準上市,在HCMV和VZV CMI檢測上的應用也有諸多報道。基于以上研究,本論文應用這一新的IFN-γ釋放試驗評價成人的VZV特異性CMI,考察研究對象接種水痘疫苗后細胞免疫應答水平的變化。在本研究中,我們首先優(yōu)化IFN-γ釋放試驗條件,確定了刺激抗原的處理方式、抗原加入量、全血與抗原共孵育的最佳時間、全血穩(wěn)定性等,確定試驗的最佳條件。然后隨機選擇12名成人作為研究對象,在接種前采集全血用于ELISA試驗檢測其中IFN-γ釋放水平,考察未知人群針對VZV的CMI水平。每人接種水痘減毒活疫苗一支,21天后采集全血檢測IFN-γ釋放水平,與接種前水平進行比較,觀察個體接種疫苗后CMI水平的變化。本研究試驗結果發(fā)現(xiàn),(1)刺激抗原的處理方式、抗原加入量、全血與抗原共孵育的最佳時間、全血穩(wěn)定性等均對干擾素-γ釋放有影響,紫外滅活的水痘抗原刺激效果較好,全血與抗原共孵育48h左右較為合適,全血樣本應盡快進行孵育試驗；(2)12名研究對象接種水痘減毒活疫苗前全血中干擾素-γ釋放水平存在差異,接種疫苗后均有不同程度提高,干擾素-γ釋放水平幾何平均值(GMT)接種前后分別為6.13pg/ml和234.75pg/ml。由于年齡、性別以及身體狀況等不同,增長的倍數(shù)和數(shù)值在個體間均存在較大差異。(3)由于樣本量有限,無法進行統(tǒng)計分析,難以確定高危人群干擾素-γ釋放水平閡值,接下來將擴大樣本量進行研究,確定水痘-帶狀皰疹易感人群的干擾素-γ釋放水平范圍,期望應用該法指導帶狀皰疹臨床研究中高危人群的篩選。
【關鍵詞】：水痘帶狀皰疹病毒 細胞免疫 干擾素-γ釋放試驗
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R752.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-23
• 1.1 研究背景介紹11-14
• 1.1.1 VZV相關疾病11-12
• 1.1.2 水痘和帶狀皰疹的發(fā)病機制和傳播途徑12-13
• 1.1.3 水痘和帶狀皰疹的流行情況13-14
• 1.2 水痘-帶狀皰疹病毒14-16
• 1.3 水痘和帶狀皰疹的防治16-18
• 1.3.1 水痘和帶狀皰疹的預防和治療16-17
• 1.3.2 水痘疫苗及帶狀皰疹疫苗17-18
• 1.4 水痘疫苗和帶狀皰疹疫苗免疫效果評價18-23
• 1.4.1 體液免疫效果評價18-19
• 1.4.2 細胞免疫效果評價19-23
• 本論文研究目的、思路和方法23-24
• 第二章 材料與方法24-32
• 2.1 主要試驗材料、儀器設備、耗材24-26
• 2.1.1 材料24
• 2.1.2 主要試劑24
• 2.1.3 主要溶液及其配制24-25
• 2.1.4 主要儀器設備25-26
• 2.1.5 主用耗材26
• 2.2 試驗方法26-32
• 2.2.1 VZV刺激抗原的制備26-27
• 2.2.2 新鮮全血的采集27
• 2.2.3 全血與刺激抗原共孵育27
• 2.2.4 hIFN-γ ELISA試驗27-28
• 2.2.5 比較不同方式制備的抗原的刺激效果28-29
• 2.2.6 VZV抗原中其他成分對IFN-γ釋放的影響29
• 2.2.7 不同孵育時間對IFN-γ釋放的影響29-30
• 2.2.8 不同抗原量對IFN-γ釋放的影響30
• 2.2.9 全血放置時間對IFN-γ釋放的影響30
• 2.2.10 觀察個體接種水痘疫苗前后IFN-γ釋放水平的變化30-31
• 2.2.11 結果統(tǒng)計和分析31-32
• 第三章 結果與討論32-40
• 3.1 不同方式制備的抗原的刺激效果比較32
• 3.2 VZV抗原中其他成分對IFN-γ釋放的影響32-33
• 3.3 不同孵育時間對IFN-γ釋放的影響33-34
• 3.4 不同抗原量對IFN-γ釋放的影響34-35
• 3.5 全血穩(wěn)定性35-36
• 3.6 觀察個體接種水痘疫苗前后IFN-γ釋放水平的變化36-37
• 3.7 討論37-40
• 結論40-41
• 參考文獻41-46
• 致謝46

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