發(fā)布時(shí)間：2020-05-07 14:56

【摘要】：目的:腦型瘧疾(cerebral malaria,CM)是由惡性瘧原蟲感染所致,是嚴(yán)重危害人類生命健康的瘧疾并發(fā)癥。大量的文獻(xiàn)指出,腦瘧的發(fā)病機(jī)制可能與血小板活化。過度的炎癥反應(yīng)以及微血栓的形成等多種因素相關(guān)。因此,如何減少免疫性病理?yè)p傷的發(fā)生,可能是預(yù)防以及治療腦瘧的關(guān)鍵。目前研究發(fā)現(xiàn),在缺血、缺氧、創(chuàng)傷以及炎癥損傷的動(dòng)物模型中,促紅細(xì)胞生成素(EPO)表現(xiàn)出良好的神經(jīng)保護(hù)作用。并且,在腦瘧動(dòng)物模型中,小鼠經(jīng)過EPO治療后,可觀察到腦瘧發(fā)生減少的現(xiàn)象,由此可見,EPO具備了抗CM的作用。促血小板生成素(TPO)作為調(diào)節(jié)巨核系細(xì)胞成熟分化和血小板生成的重要造血因子,和EPO存在著一定的同源性。我們前期實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示,尾靜脈給予人重組TPO,TPO能夠顯著抑制感染P.bANKA的C57BL/6小鼠腦瘧的發(fā)生。和EPO類似,促血小板生成素也是由與配體分子c-Mpl結(jié)合而發(fā)揮著生物學(xué)的作用。目前的研究發(fā)現(xiàn),其配體除了表達(dá)于巨核細(xì)胞及其前體細(xì)胞和血小板之外,還被發(fā)現(xiàn)于部分的免疫細(xì)胞中,如人類的多形核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞(DC)、中性粒細(xì)胞等,并可能在一定程度上影響著細(xì)胞的免疫功能。因此,本實(shí)驗(yàn)擬在已有的工作基礎(chǔ)上,將進(jìn)一步研究TPO對(duì)腦型瘧疾的免疫調(diào)節(jié)作用,力求揭示TPO抑制腦瘧發(fā)生的可能機(jī)制,從而為TPO的效應(yīng)特點(diǎn)闡明以及腦瘧的治療提供新的理論依據(jù)。研究方法:構(gòu)建P.b ANKA感染的C57BL/6小鼠模型,在研究中我們將觀察TPO對(duì)感染小鼠脾臟中的樹突狀細(xì)胞、Th1免疫應(yīng)答及炎癥水平的影響。同時(shí),DC2.4細(xì)胞株進(jìn)行體外培養(yǎng),在LPS和/或TPO刺激作用下,通過流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、Real-time PC R等手段觀察DC 2.4的TLR和表面分子及NF-κB P65 mRNA水平的影響,與此同時(shí),檢測(cè)c-Mpl的表達(dá)情況。結(jié)果:在C57BL/6小鼠模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn):(1)TPO能夠抑制感染小鼠腦瘧的發(fā)生;(2)TPO可以抑制感染小鼠脾臟中樹突狀細(xì)胞的生物功能;(3)TPO降低了感染小鼠脾臟Th1細(xì)胞應(yīng)答和前炎癥因子的表達(dá);(4)TPO能夠影響感染小鼠脾臟細(xì)胞中NF-κB通路的活化。在LPS刺激DC2.4的細(xì)胞模型中,我們發(fā)現(xiàn):(1)TPO抑制DC2.4細(xì)胞TLR4的mRNA相對(duì)表達(dá)水平;(2)TPO抑制DC2.4細(xì)胞的成熟活化;(3)TPO降低DC2.4細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)水平;(4)TPO抑制DC2.4細(xì)胞的c-Mpl的表達(dá)。結(jié)論:在P.bANKA感染C57BL/6小鼠時(shí),TPO可通過抑制樹突細(xì)胞生物功能,降低Th1型應(yīng)答和前炎癥因子水平,從而抑制感染小鼠腦瘧的發(fā)生。在體外實(shí)驗(yàn)中,TPO能夠降低DC2.4細(xì)胞TLR4的表達(dá),同時(shí)可抑制相關(guān)炎癥因子的分泌。這可能與TPO作用于DC2.4的c-Mpl,從而影響了NF-κB通路相關(guān)。
【圖文】：

如圖 1A 所示，Pb 組小鼠于感染后的第 5 天開始死亡7 、8 、12 天陸續(xù)死亡，而Pb+TPO 組則只在感染的后第止到感染后的第 15 天，，Pb+TPO 組仍有 7 只小鼠存活；b+TPO 組在感染后的第 3 天油鏡下血涂片觀察，可見瘧），感染的紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)是不斷增加的感染率沒有明顯差異。因此，感染小鼠經(jīng)過 TPO 的治療量大幅度減少，即 TPO 具有抗腦瘧發(fā)生的功能。D a y s p o s t in f e c tio n ( d )Percentsurvival（%（0 5 1 0 1 5 2 005 01 0 0P b AP b A + T P OD a y s p o s t in f e c tio n ( d )Parasitemia(%)0 5 1 0 1 5 2 001 02 03 04 0 P bP b + T P OA B

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文3.1.2 TPO 對(duì)感染小鼠脾臟中樹突狀細(xì)胞的影響樹突狀細(xì)胞在瘧原蟲抗原的刺激下，發(fā)生活化，活化后的樹突狀細(xì)胞能夠激活由 T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。如圖 2A 所示，我們對(duì)感染的后第 0、3、5 天的脾臟中樹突狀細(xì)胞（CD11c+）進(jìn)行檢測(cè)，在感染后的第 3 、5 天，Pb 組和正常對(duì)照組比較，Pb 組中的樹突狀細(xì)胞百分率顯著增加（P＜0.05 或 P＜0.01），同時(shí)，小鼠脾細(xì)胞中樹突狀細(xì)胞百分率是實(shí)驗(yàn)組（Pb+TPO）低于 Pb 組的，并且在感染后第 5 天，樹突狀細(xì)胞百分率是明顯降低于 Pb 組，（P＜0.01），并且在圖 2B 中，能夠清晰的看出感染后第 5 天各組中樹突狀細(xì)胞的百分率，Pb+TPO 組低于 Pb 組，由此推測(cè)出，脾臟樹突狀細(xì)胞水平可能受到了 TPO 抑制作用，并且在感染后的第 5 天抑制效果更為明顯。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R531.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Kenneth Maiese;;Erythropoietin and diabetes mellitus[J];World Journal of Diabetes;2015年14期

2 chuchard Punsawad;;Effect of malaria components on blood mononuclear cells involved in immune response[J];Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine;2013年09期

本文編號(hào)：2653146