【摘要】：第一部分 丙型肝炎的相關(guān)生化特征分析【背景】丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一種血源傳播病毒,感染人體后可引發(fā)丙型病毒性肝炎,并且極易發(fā)展為慢性感染狀態(tài),進(jìn)而進(jìn)展為肝硬化、肝癌等終末期肝臟疾病。HCV不僅侵害肝臟組織,也會侵害全身其他器官和免疫系統(tǒng)。丙型肝炎是一種免疫相關(guān)疾病,感染HCV后涉及到身體多個(gè)系統(tǒng)的不同反應(yīng)。眾多研究發(fā)現(xiàn)HCV不僅具有嗜肝性,在肝細(xì)胞中復(fù)制和繁殖,也可在外周血細(xì)胞、腎臟和骨髓中復(fù)制,而且也具有一定的淋巴細(xì)胞嗜性。感染HCV后,患者的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類、血小板計(jì)數(shù)以及血液生化指標(biāo)都會發(fā)生變化,因此,了解HCV患者肝功能相關(guān)指標(biāo)及HCV感染后不同結(jié)局的生化特征,對評估疾病進(jìn)展和患者預(yù)后有重要意義。【目的】篩選肝功能相關(guān)的生化指標(biāo)以及比較感染HCV后的不同結(jié)局的患者的生理狀態(tài),旨在發(fā)現(xiàn)最適合反映丙肝感染狀況的生化指標(biāo)�！痉椒ā坎捎昧餍胁W(xué)調(diào)查收集130例HCV自限清除者,173例持續(xù)感染者的相關(guān)信息。并采集每位調(diào)查對象的清晨空腹10mL靜脈血,運(yùn)用相應(yīng)的儀器檢測血常規(guī)、肝功能、凝血功能和甲狀腺功能。偏相關(guān)分析肝功能的相關(guān)生化指標(biāo)以及與HCV感染狀態(tài)的關(guān)系。【結(jié)果】調(diào)整年齡性別后的偏相關(guān)分析表明,淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)(LYMPH)、單核細(xì)胞(MONO)、凝血酶原時(shí)間(PT)和ALT、AST之間存在正相關(guān)關(guān)系。HCV不同感染結(jié)局的血常規(guī)、肝功能和凝血功能之間存在顯著差異。納入年齡、性別和以上在不同結(jié)局組分布有差異的生化指標(biāo)進(jìn)行逐步回歸分析,結(jié)果表明ALT、ADA和HCV載量之間存在正相關(guān)性(P=0.008,P=0.032)�！窘Y(jié)論】LYMPH、MONO和PT是與肝功能相關(guān)的生化指標(biāo),HCV自限清除組和HCV持續(xù)感染組在血常規(guī)、肝功能和凝血功能之間存在多項(xiàng)指標(biāo)差異。而ALT、ADA水平和HCV載量呈正相關(guān)關(guān)系。第二部分我國高危人群NF-κB基因多態(tài)性與HCV易感性及感染轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性研究【背景】據(jù)估計(jì),世界范圍內(nèi)有1億8500萬多人感染丙型肝炎病毒(HCV)。在中國,HCV的感染者約占總?cè)丝诘?.6%。超過70%的HCV感染者無法自發(fā)清除病毒,進(jìn)而會發(fā)展為慢性丙型肝炎(CHC)、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌。感染HCV后的多種轉(zhuǎn)歸結(jié)局是機(jī)體遺傳因素和病毒因素綜合作用的結(jié)果。NF-κB在初始免疫和獲得性免疫中都發(fā)揮著必不可少的作用,NF-κB可被一系列的刺激物激活,如細(xì)菌、病毒等抗原、細(xì)胞因子和氧化應(yīng)激,相應(yīng)的引發(fā)眾多炎癥調(diào)節(jié)因子的轉(zhuǎn)錄和激活。因而,NF-κB信號途徑基因的異�；罨彤惓Ｕ{(diào)節(jié)可導(dǎo)致某些自身免疫性疾病、炎癥和惡性腫瘤發(fā)生。此外,NF-κB信號通路也可通過雙向調(diào)節(jié)參與某些感染中的病毒逃逸和滅活。NF-κB信號通路基因的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)和眾多疾病之間存在顯著的相關(guān)性�；谏鲜鯪F-κB在宿主免疫反應(yīng)中的抗感染作用,因此,NF-κB信號通路基因變異可能會影響HCV的感染進(jìn)程和預(yù)后。【目的】探討NF-κB信號通路基因變異在HCV的感染進(jìn)程和預(yù)后中的可能的作用�！痉椒ā坎捎貌±龑φ昭芯糠桨�,納入2581例HCV感染高危人群,運(yùn)用多因素Logistic回歸模型分析NF-κB信號通路基因上的4個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)(rs230530、rs3774963、rs1056890和rs11820062)與HCV易感性和感染轉(zhuǎn)歸之間的關(guān)聯(lián)性。并采用三種模型(相加模型、顯性模型和隱性模型),分析每個(gè)SNP位點(diǎn)和HCV易感性和感染轉(zhuǎn)歸之間的關(guān)系�！窘Y(jié)果】調(diào)整年齡、性別和感染途徑后,Logistic回歸分析顯示,攜帶rs11820062 TT基因型的個(gè)體感染HCV的風(fēng)險(xiǎn)顯著增高(P=0.002)。在相加和顯性模型中,rs11820062 T等位基因和HCV感染易感性的關(guān)系仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002,P=0.003)。在顯性模型中,rs230530 C等位基因在對照組和HCV感染組之間的分布具有顯著差異(P=0.005)。采用Cochran-Armitage趨勢性檢驗(yàn)對rs11820062 T等位基因和rs230530 C等位基因?qū)CV易感性的累積效應(yīng)進(jìn)行分析,結(jié)果顯示攜帶越多危險(xiǎn)等位基因的個(gè)體,感染HCV的風(fēng)險(xiǎn)也越高,攜帶3種危險(xiǎn)等位基因擁有最高的患病風(fēng)險(xiǎn)(調(diào)整OR=1.894,95%CI=1.230-2.758)�！窘Y(jié)論】NF-κB信號通路基因遺傳變異與中國高危人群感染HCV易感性相關(guān),rs11820062 T、rs230530 C等位基因顯著提高了HCV的感染風(fēng)險(xiǎn)。
【圖文】：

圖 2 Regulome DB 中不同評分 SNP 的潛在功能意義3.6 SNPs 基因分型3.61 候選 SNPs 的基因分型方法，采用廣泛應(yīng)用的 TaqMan 探針實(shí)時(shí)熒光量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)技術(shù)。TaqMan 探針的熒光與目標(biāo)序列的擴(kuò)增相關(guān)，其原理為利用 Taq 酶 5’→3的外切活性，，通過加入和 DNA 模板序列的特異型雜交，熒光基團(tuán)連接在探針5’ 末端表現(xiàn)為 518nm 的峰值熒光，而淬滅劑則在 3’ 末端，表現(xiàn)為 582nm 的值熒光。當(dāng)探針完整時(shí)，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光處于被抑制狀態(tài)。但在進(jìn)行延伸應(yīng)時(shí)，熒光發(fā)射基團(tuán)和淬滅劑分離。模板每復(fù)制一次，熒光信號就復(fù)制一次，著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)的數(shù)量呈正比關(guān)系。所用 PCR 反應(yīng)體系總量為 5μL，經(jīng)歷 40 個(gè)循環(huán)。PCR

26圖3 SDS2.4軟件基因分型示意圖3.7 主要儀器ABI PRISM 7900HT 型熒光定量 PCR 儀 美國 Applied Biosystems 公司ABI 9700 PCR 擴(kuò)增儀 美國 Applied Biosystems 公司MJ PTC-200 型 PCR 擴(kuò)增儀 美國 MJ Research 公司EP5604 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀 南京科寶儀器研究所DYCP-31D 水平電泳槽 南京科寶儀器研究所AlphaImager2200 紫外成像儀 美國自然基因有限公司DK-600S 型恒溫水浴箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司72-21 型高速冷凍離心機(jī) 德國 Eppendorf 公司
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R512.63

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2644137