【摘要】：金黃色葡萄球菌是燒傷后引起感染的主要病原菌,耐抗生素金黃色葡萄球菌臨床分離株的不斷出現(xiàn)給控制感染造成諸多困境。噬菌體是能特異感染細菌的病毒,噬菌體裂解細菌的具有效性和特異性。因此,針對耐藥性細菌的噬菌體療法又重新引起關注。目的通過建立小鼠燒傷的感染模型,觀察裂解性噬菌體HYZ21對動物燒傷后感染金黃色葡萄球菌的治療效果,同時分析噬菌體HYZ21的遺傳學特征,為噬菌體療法在金黃色葡萄球菌所致的燒傷感染的應用提供初步依據(jù)。方法小鼠燒傷后皮下注射不同濃度的金黃色葡萄球菌,測定能引起動物全部死亡的細菌最小致死量。以細菌的最小致死量感染燒傷動物后,經(jīng)不同途徑(皮下、腹腔和肌肉)給予噬菌體治療并觀察動物的存活率。采用Illumina HiseqPE150平臺對噬菌體HYZ21基因組進行測序,通過GeneMarkS軟件對測序的基因組進行編碼基因預測。結(jié)果在72小時內(nèi)使燒傷動物全部死亡的細菌濃度為1×10~9 CFU/mL,即最小致死量。以細菌最小致死量皮下感染燒傷動物后,立即經(jīng)不同途徑給予10倍感染復數(shù)的噬菌體濃度(1×10~111 PFU/mL)。結(jié)果顯示,燒傷合并感染未經(jīng)噬菌體治療,動物存活率為23.8%;燒傷合并感染后皮下注射噬菌體,動物的存活率是66.7%;燒傷合并感染后腹腔注射噬菌體,動物72小時的存活率62.0%;燒傷合并感染后肌肉注射噬菌體,動物的存活率僅為23.8%。經(jīng)皮膚和腹腔注射噬菌體的動物,其存活率明顯高于感染組,具有統(tǒng)計學意義。噬菌體HYZ21基因組的全長為139,675 bp,G+C%含量為30.42%,有208個編碼基因和4個tRNA基因。結(jié)論噬菌體HYZ21經(jīng)皮下和腹腔途徑對燒傷合并金黃色葡萄球菌感染的動物具有較明顯的保護作用,提示噬菌體療法在燒傷合并感染中的潛在作用。HYZ21屬于有尾病毒目、肌尾病毒科中的Kayvirus屬噬菌體。
【圖文】：

據(jù)噬菌體的最佳感染復數(shù)，確定注射治療的濃度。許多文獻都采感染復數(shù)觀察噬菌體療法的抗感染效果。所以，本項實驗也采用染復數(shù)的噬菌體數(shù)量（即 1×1011PFU/mL ，體積 250μL）。 統(tǒng)計學處理兩樣本率的比較采用四表格資料的 2檢驗。實驗結(jié)果 初步純化的噬菌體顆粒濃度取 100μL 噬菌體保存液（含噬菌體顆粒）經(jīng)等倍比稀釋分別與 100混合，加到半固體培養(yǎng)基中，然后傾倒在固體培養(yǎng)基表面，置 3通過噬斑計數(shù)，得知噬菌體顆粒保存液中噬菌體的濃度是 2.5×1011U/mL＝噬斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×10）。噬斑完全透明，直徑約 3～4mm，見A B

表 2.1 噬菌體的 HYZ21MOI 測定感染復數(shù)（MOI） 噬菌體（PFU/mL） 宿主菌（CFU/mL） 釋放的噬菌體（PFU/mL）100 2×10102×108(2.3 ± 0.5) ×101110 2×1092×108(6.8 ± 0.6) ×10111 2×1082×108(5.6 ± 0.9) ×10100.1 2×1072×108(3.5 ± 0.3) ×1090.01 2×1062×108(1.3 ± 0.7) ×1080.001 2×1052×108(4.7 ± 1.4) ×1062.3.3 動物燙傷模型經(jīng)燙傷儀造成燙傷的過程中，第 1 組動物在 7 天內(nèi)全部存活，第 2 組和第 3組動物出現(xiàn)不同程度的死亡，見圖 2.2。背部燙傷的面積約為 2.5 cm2, 表面呈紅、腫，無明顯結(jié)痂形成（圖 2.3）。因此，燙傷持續(xù)時間為 10 秒鐘后，動物在 7 天內(nèi)全部存活，活動正常，且燙傷局部無明顯結(jié)痂形成，應視為燙傷模型的建立。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R644;R515

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