【摘要】：金黃色葡萄球菌是燒傷后引起感染的主要病原菌,耐抗生素金黃色葡萄球菌臨床分離株的不斷出現(xiàn)給控制感染造成諸多困境。噬菌體是能特異感染細(xì)菌的病毒,噬菌體裂解細(xì)菌的具有效性和特異性。因此,針對(duì)耐藥性細(xì)菌的噬菌體療法又重新引起關(guān)注。目的通過(guò)建立小鼠燒傷的感染模型,觀察裂解性噬菌體HYZ21對(duì)動(dòng)物燒傷后感染金黃色葡萄球菌的治療效果,同時(shí)分析噬菌體HYZ21的遺傳學(xué)特征,為噬菌體療法在金黃色葡萄球菌所致的燒傷感染的應(yīng)用提供初步依據(jù)。方法小鼠燒傷后皮下注射不同濃度的金黃色葡萄球菌,測(cè)定能引起動(dòng)物全部死亡的細(xì)菌最小致死量。以細(xì)菌的最小致死量感染燒傷動(dòng)物后,經(jīng)不同途徑(皮下、腹腔和肌肉)給予噬菌體治療并觀察動(dòng)物的存活率。采用Illumina HiseqPE150平臺(tái)對(duì)噬菌體HYZ21基因組進(jìn)行測(cè)序,通過(guò)GeneMarkS軟件對(duì)測(cè)序的基因組進(jìn)行編碼基因預(yù)測(cè)。結(jié)果在72小時(shí)內(nèi)使燒傷動(dòng)物全部死亡的細(xì)菌濃度為1×10~9 CFU/mL,即最小致死量。以細(xì)菌最小致死量皮下感染燒傷動(dòng)物后,立即經(jīng)不同途徑給予10倍感染復(fù)數(shù)的噬菌體濃度(1×10~111 PFU/mL)。結(jié)果顯示,燒傷合并感染未經(jīng)噬菌體治療,動(dòng)物存活率為23.8%;燒傷合并感染后皮下注射噬菌體,動(dòng)物的存活率是66.7%;燒傷合并感染后腹腔注射噬菌體,動(dòng)物72小時(shí)的存活率62.0%;燒傷合并感染后肌肉注射噬菌體,動(dòng)物的存活率僅為23.8%。經(jīng)皮膚和腹腔注射噬菌體的動(dòng)物,其存活率明顯高于感染組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。噬菌體HYZ21基因組的全長(zhǎng)為139,675 bp,G+C%含量為30.42%,有208個(gè)編碼基因和4個(gè)tRNA基因。結(jié)論噬菌體HYZ21經(jīng)皮下和腹腔途徑對(duì)燒傷合并金黃色葡萄球菌感染的動(dòng)物具有較明顯的保護(hù)作用,提示噬菌體療法在燒傷合并感染中的潛在作用。HYZ21屬于有尾病毒目、肌尾病毒科中的Kayvirus屬噬菌體。
【圖文】：

據(jù)噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)，確定注射治療的濃度。許多文獻(xiàn)都采感染復(fù)數(shù)觀察噬菌體療法的抗感染效果。所以，本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)也采用染復(fù)數(shù)的噬菌體數(shù)量（即 1×1011PFU/mL ，體積 250μL）。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理兩樣本率的比較采用四表格資料的 2檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 初步純化的噬菌體顆粒濃度取 100μL 噬菌體保存液（含噬菌體顆粒）經(jīng)等倍比稀釋分別與 100混合，加到半固體培養(yǎng)基中，然后傾倒在固體培養(yǎng)基表面，置 3通過(guò)噬斑計(jì)數(shù)，得知噬菌體顆粒保存液中噬菌體的濃度是 2.5×1011U/mL＝噬斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×10）。噬斑完全透明，直徑約 3～4mm，見(jiàn)A B

表 2.1 噬菌體的 HYZ21MOI 測(cè)定感染復(fù)數(shù)（MOI） 噬菌體（PFU/mL） 宿主菌（CFU/mL） 釋放的噬菌體（PFU/mL）100 2×10102×108(2.3 ± 0.5) ×101110 2×1092×108(6.8 ± 0.6) ×10111 2×1082×108(5.6 ± 0.9) ×10100.1 2×1072×108(3.5 ± 0.3) ×1090.01 2×1062×108(1.3 ± 0.7) ×1080.001 2×1052×108(4.7 ± 1.4) ×1062.3.3 動(dòng)物燙傷模型經(jīng)燙傷儀造成燙傷的過(guò)程中，第 1 組動(dòng)物在 7 天內(nèi)全部存活，第 2 組和第 3組動(dòng)物出現(xiàn)不同程度的死亡，見(jiàn)圖 2.2。背部燙傷的面積約為 2.5 cm2, 表面呈紅、腫，無(wú)明顯結(jié)痂形成（圖 2.3）。因此，燙傷持續(xù)時(shí)間為 10 秒鐘后，動(dòng)物在 7 天內(nèi)全部存活，活動(dòng)正常，且燙傷局部無(wú)明顯結(jié)痂形成，應(yīng)視為燙傷模型的建立。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R644;R515

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本文編號(hào)：2637505