【摘要】：目的:檢測卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒(Kaposi's Sarcoma-associated Herpesvirus,KSHV)能否在體外感染神經(jīng)元細胞SH-SY5Y,檢測感染與未感染神經(jīng)元細胞的增殖、遷移等特點并篩選差異表達基因。方法:(1)體外常規(guī)培養(yǎng)islk.219細胞,采用強力霉素與丁酸鈉誘導(dǎo)其釋放KSHV病毒于上清液中,采用病毒濃縮法提取KSHV,并用其感染神經(jīng)元細胞SH-SY5Y,48h后采用熒光顯微鏡觀察確定感染成功,并觀察細胞形態(tài)變化。(2)采用實時定量PCR(real-time-PCR,RT-PCR)檢測KSHV潛伏態(tài)基因潛伏相關(guān)核抗原(Latency-associated Nuclear Antigen,LANA)與裂解態(tài)基因ORF26、K8.1A、RTA的m RNA表達水平。(3)采用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)檢測了KSHV潛伏態(tài)基因LANA與裂解態(tài)基因RTA、K8.1A的表達水平。(4)采用MTT和Transwell檢測KSHV對細胞增殖及遷移能力的影響,采用流式細胞技術(shù)檢測感染與未感染SH-SY5Y細胞的細胞周期,采用Western Blot檢測細胞周期蛋白CDK4、CDK6、Cyclin D1、P27的表達水平,在SH-SY5Y細胞中,轉(zhuǎn)染LANA質(zhì)粒后,進一步比較CDK4、CDK6、Cyclin D1、P27的表達水平。(5)利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)篩選KSHV感染SH-SY5Y細胞后的差異基因,采用Gene Ontology、KEGG等生物信息技術(shù)對測序結(jié)果進行了分析,并對Notch信號通路活性進行了檢測。結(jié)果:(1)成功誘導(dǎo)islk.219細胞產(chǎn)生KSHV病毒,熒光顯微鏡觀察到KSHV在體外感染神經(jīng)元細胞SH-SY5Y后的綠色熒光,確定感染成功;感染后細胞形態(tài)由梭形聚團生長改變?yōu)榧毎兇?形態(tài)變圓和分散生長;(2)KSHV感染SH-SY5Y細胞后潛伏態(tài)基因LANA與裂解態(tài)基因RTA、ORF26、K8.1A的m RNA及蛋白表達水平顯著提高(P0.05)。(3)KSHV感染神經(jīng)元細胞SH-SY5Y后,增殖能力顯著提高,遷移能力減弱。細胞周期結(jié)果顯示KSHV感染后能促進細胞G0/G1期進展。細胞周期蛋白Cyclin D 1、CDK 4和CDK 6的表達水平升高,P27的表達水平降低。LANA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進SH-SY5Y細胞后,Cyclin D 1、CDK 4的表達水平升高。(4)轉(zhuǎn)錄組測序檢測到KSHV感染SH-SY5Y后,11258條基因表達上調(diào),1967條基因表達下調(diào),KEGG pathway提示Notch信號通路相關(guān)性較強,Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)KSHV感染的SH-SY5Y細胞中Notch信號通路蛋白Notch1、NICD及其下游基因RBP-JK、Hes 1的表達水平顯著提高(P0.001)。結(jié)論:(1)KSHV能夠在體外成功感染神經(jīng)元細胞SH-SY5Y,并表達其潛伏態(tài)與裂解態(tài)相關(guān)蛋白。(2)KSHV感染神經(jīng)元細胞后促進其增殖,細胞遷移能力減弱。(3)KSHV感染神經(jīng)元細胞后上調(diào)了Notch信號通路相關(guān)蛋白的表達,這可能與促進細胞增殖能力相關(guān)。
【圖文】：

強力霉素與丁酸鈉誘導(dǎo)islk.219細胞后顯微鏡下觀察細胞形態(tài)（100×）

Taq-manrealtimePCR標準曲線
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R511

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7 何華虹 譯;干細胞“干”勁大[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

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本文編號：2637289