【摘要】：目的:了解研究地區(qū)(云南、廣西、四川、新疆和廣東)HIV-1暴露新生兒的感染情況,初步探索HIV-1宮內(nèi)感染的準(zhǔn)種傳播進(jìn)化規(guī)律。分析不同抗病毒藥物治療方案(干預(yù)組為三聯(lián)用藥,對(duì)照組為單一用藥)對(duì)新生兒原發(fā)耐藥株產(chǎn)生的影響,探索兩種抗病毒治療方案對(duì)新生兒體內(nèi)病毒準(zhǔn)種進(jìn)化的潛在影響,為優(yōu)化新生兒預(yù)防治療用藥方案提出參考。方法:收集研究地區(qū)孕期和產(chǎn)時(shí)均未使用過(guò)抗病毒藥物或臨產(chǎn)后才開(kāi)始用藥的HIV-1陽(yáng)性孕產(chǎn)婦及其所生新生兒,將暴露新生兒按隨機(jī)化原則分為干預(yù)組和對(duì)照組,實(shí)施不同的抗病毒預(yù)防治療方案。對(duì)新生兒產(chǎn)后系列干血斑樣本進(jìn)行HIV-1核酸定性檢測(cè),確定其感染狀態(tài)。第一部分研究收集發(fā)生宮內(nèi)感染新生兒的產(chǎn)時(shí)干血斑及其母親的產(chǎn)時(shí)全血、血漿樣本,第二部分研究收集3例干預(yù)組和5例對(duì)照組嬰幼兒的產(chǎn)時(shí)、治療后6周、3個(gè)月的干血斑樣本。利用一代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)各樣本的病毒亞型和耐藥突變株,深度測(cè)序技術(shù)檢測(cè)樣本內(nèi)病毒三基因區(qū)(GAG、POL和ENV區(qū))的準(zhǔn)種序列情況,并使用序列分析軟件和統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析樣本中準(zhǔn)種分布是否存在差異、計(jì)算樣本內(nèi)(間)的基因離散率,繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析病毒進(jìn)化規(guī)律。結(jié)果1.暴露新生兒感染情況:云南、廣西、四川、新疆和廣東地區(qū)中,孕期和產(chǎn)時(shí)均未使用過(guò)抗病毒治療藥物或臨產(chǎn)后才開(kāi)始用藥的HIV-1陽(yáng)性孕產(chǎn)婦所生新生兒陽(yáng)性率分別為:9.38%、17.39%、7.02%、7.69%和0。2.三對(duì)宮內(nèi)感染母子病毒亞型:兩對(duì)為CRF08_BC,一對(duì)為CRF01_AE。9份樣本中均未檢測(cè)到耐藥突變株。3.深度測(cè)序結(jié)果顯示:母親全血比血漿中病毒準(zhǔn)種復(fù)雜度高,而新生兒全血樣本中病毒準(zhǔn)種復(fù)雜度比前兩者低。結(jié)合基因離散率和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)可發(fā)現(xiàn):新生兒感染了母親體內(nèi)大多數(shù)病毒準(zhǔn)種。4.8例嬰幼兒病毒亞型結(jié)果:4例為CRF08_BC、2例為CRF07_BC、1例B和1例CRF01_AE;除一例對(duì)照組嬰幼兒查出有Y181C耐藥突變,其余樣本均未檢測(cè)到耐藥突變。5.深度測(cè)序結(jié)果顯示:干預(yù)組和對(duì)照組產(chǎn)時(shí)基線(xiàn)樣本病毒復(fù)雜度無(wú)差異,對(duì)比兩者在接受治療后的相同時(shí)間點(diǎn)樣本內(nèi)病毒三基因區(qū)準(zhǔn)種復(fù)雜性發(fā)現(xiàn):前者比后者樣本內(nèi)準(zhǔn)種分布更集中、病毒準(zhǔn)種復(fù)雜度更低,這一點(diǎn)在ENV區(qū)表現(xiàn)的最明顯。6.接受單一抗病毒治療的嬰幼兒體內(nèi)病毒變異隨時(shí)間增加而增加,與基線(xiàn)樣本間的基因距離逐漸增大。而接受三聯(lián)用藥的嬰幼兒接受治療后,各監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)樣本與基線(xiàn)樣本間的基因距離緩慢增大,但三個(gè)月時(shí)有下降的趨勢(shì)。7.每例嬰幼兒三個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣本內(nèi)三基因區(qū)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中顯示:各樣本前30個(gè)優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種均呈散在分布,并未出現(xiàn)明顯的病毒準(zhǔn)種進(jìn)化關(guān)系。結(jié)論1.研究地區(qū)中孕期和產(chǎn)時(shí)均未應(yīng)用過(guò)抗病毒藥物或臨產(chǎn)后才開(kāi)始用藥的陽(yáng)性孕產(chǎn)婦所生新生兒HIV-1感染率高于全國(guó)水平,應(yīng)進(jìn)一步加大增加早期發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性孕產(chǎn)婦及母嬰阻斷措施的實(shí)施力度,降低暴露新生兒感染率。2.HIV-1 DNA比RNA包含的病毒準(zhǔn)種信息更豐富,利用全血樣本進(jìn)行傳播的溯源分析更有利。3.三例宮內(nèi)感染新生兒感染母親體內(nèi)大多數(shù)優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種,瓶頸效應(yīng)并不明顯,可能是由于反復(fù)感染或者新生兒免疫功能不全,導(dǎo)致病毒在體內(nèi)復(fù)制變異速度加快,引起病毒多樣性。4.嬰幼兒采取單一用藥比三聯(lián)用藥可能更易產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥突變,尤其是針對(duì)非核苷類(lèi)反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)的耐藥突變,需進(jìn)一步研究觀察。5.與單一用藥方案相比,三聯(lián)用藥可有效抑制病毒的復(fù)制變異速率,降低嬰幼兒體內(nèi)病毒準(zhǔn)種分布復(fù)雜度。6.嬰幼兒產(chǎn)后的三個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣本,由于采樣時(shí)間間隔太短,病毒變異進(jìn)化范圍小,因此無(wú)法通過(guò)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)判斷優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種的傳播規(guī)律。7.同一樣本中HIV-1三基因區(qū)(POL、GAG和ENV區(qū)),ENV變異度度最大,準(zhǔn)種更復(fù)雜,POL和GAG相對(duì)保守。
【圖文】：

邐ＥＸＶ邋基邋ＥＳ逡逑．主：文芒ｇ蠼ＩＳ：邋ｒｉ：？ｉ＝；為基Ｓ本逡逑圖１．３邋０３對(duì)母嬰產(chǎn)時(shí)樣本三基因區(qū)前３０個(gè)優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)逡逑３討論逡逑研究的五個(gè)省份（云南、廣西、四川、新疆和廣東）ＨＩＶ－丨陽(yáng)性孕產(chǎn)婦所生逡逑新生兒陽(yáng)性率分別為９．３８％、１７．３９％、７．０２％、７．６９％和０，總的感染率為８．７４％。逡逑除廣東省外，其余四省暴露新生兒感染率均高于國(guó)家平均水平ｍ。發(fā)現(xiàn)了３例宮逡逑內(nèi)感染的新生兒，其母親在孕產(chǎn)期均未服用任何抗病毒藥物，且產(chǎn)時(shí)體內(nèi)病毒載逡逑量較高，可能與新生兒的感染有關(guān)。并且母子體內(nèi)的病毒亞型是當(dāng)?shù)氐牧餍衼喰湾义现唬郏担瑁担玻�。母親與新生兒均未檢測(cè)到耐藥突變株，說(shuō)明母親未使用抗病毒治療逡逑藥物，體內(nèi)的病毒沒(méi)有發(fā)生耐藥突變，也可能是其病毒載量值高的原因。針對(duì)新逡逑生兒中定性檢測(cè)出現(xiàn)的不確定結(jié)果，同一個(gè)體的系列干血斑中有樣本檢測(cè)為陽(yáng)性，逡逑也有樣本檢測(cè)為陰性

圖２．１邋Ｅ０１號(hào)三個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣本前２０個(gè)優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種分布圖逡逑統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：逡逑１．干預(yù)組和對(duì)照組嬰幼兒產(chǎn)時(shí)樣本三基因區(qū)中前３０個(gè)優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種序列頻數(shù)之逡逑最優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種序列頻數(shù)占比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（Ｐ＞0．0５）。逡逑．干預(yù)組和對(duì)照組嬰幼兒６周和３個(gè)月的樣本中ＥＮＶ區(qū)前３０個(gè)優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種序列逡逑和和最優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種序列頻數(shù)占比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別（Ｐ＜０．０５），干預(yù)組嬰幼逡逑和３個(gè)月的樣本中ＥＮＶ區(qū)前３０個(gè)優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種序列頻數(shù)之和和最優(yōu)勢(shì)準(zhǔn)種序列逡逑占比均少于對(duì)照組，干預(yù)組準(zhǔn)種分布更為分散。ＧＡＧ和ＰＯＬ區(qū)兩者差異無(wú)統(tǒng)逡逑義（Ｐ＞0．0５）。逡逑例研究對(duì)象三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的樣本內(nèi)（間）基因離散率逡逑例研究對(duì)象三個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣本內(nèi)Ｈ基因區(qū)（ＧＡＧ、ＰＯＬ和ＥＮＶ區(qū)）平均基因逡逑范圍分別為０．４６－０．９２％邋（平均０．６３％）、０．５２－０．８６％邋（０．６５％）和０．４９－０．８７％逡逑６％）。８例研究對(duì)象的樣本內(nèi)三基因區(qū)總體呈觀穩(wěn)定趨勢(shì)，ｆｌｉＭ時(shí)可發(fā)現(xiàn)隨逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R512.91

【參考文獻(xiàn)】

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1 童，

本文編號(hào)：2633911