【摘要】：目的:了解結(jié)核分枝桿菌耐氯法齊明基因的臨床現(xiàn)狀,為制定含氯法齊明的耐藥結(jié)核病治療方案提供實驗室依據(jù)。方法:收集于我院門診、住院肺結(jié)核患者痰液標(biāo)本,進(jìn)行涂片抗酸染色和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、菌型鑒定及藥物敏感試驗(包括一線和二線抗結(jié)核藥物),篩選結(jié)核分枝桿菌臨床株,提取結(jié)核分枝桿菌DNA,然后利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增氯法齊明耐藥基因(Rv0678,Rv2535c,Rv1979c)全長,進(jìn)行基因測序得出結(jié)核分枝桿菌耐藥基因型結(jié)果。最后用基因測序結(jié)果和結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv基因序列與美國國立生物技術(shù)信息中心進(jìn)行對比,進(jìn)一步分析結(jié)果。結(jié)果:獲得結(jié)核分枝桿菌臨床株共121株(60例敏感結(jié)核分枝桿菌、5例單耐藥結(jié)核分枝桿菌、5例多耐藥結(jié)核分枝桿菌以及51例耐多藥結(jié)核分枝桿菌),并檢測3個氯法齊明耐藥基因:Rv2535c、Rv1979c和Rv0678。在敏感菌株中未檢測到氯法齊明耐藥基因突變,突變率為0%(0/60)。在單耐藥及多耐藥菌株中未檢測氯法齊明耐藥基因突變,突變率為0%(0/5)。在耐多藥株中檢測到2株Rv0678基因突變(GCC153GTC,ATG146AGG),突變率為3.9%(2/51);檢測到2株Rv2535c基因突變(ACC56GCC,TTG121GTG),突變率為3.9%(2/51);未檢測到Rv1979c突變。結(jié)核分枝桿菌臨床株耐氯法齊明基因Rv0678和Rv2535c總基因突變率均為1.7%(2/121)。結(jié)論:耐藥結(jié)核病中存在氯法齊明耐藥基因的突變,存在氯法齊明耐藥的風(fēng)險,因此在擬定含氯法齊明抗結(jié)核化療方案中應(yīng)考慮到耐藥基因突變,為降低耐藥的風(fēng)險,在用藥前進(jìn)行氯法齊明藥敏試驗及耐藥基因檢測是有必要的,同時本研究發(fā)現(xiàn)的耐氯法齊明的4個新型突變,為進(jìn)一步研究氯法齊明的耐藥機(jī)制奠定了實驗室基礎(chǔ)。
【圖文】：

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 圖 1 ND-1000 檢測結(jié)核分枝桿菌 DNA 濃度2.4 PCR 擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌 Rv0678、Rv2535c(PepQ)、RV1979c得結(jié)果2.4.1 PCR 擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌 Rv0678 基因所得產(chǎn)物凝膠結(jié)果121 例結(jié)核分枝桿菌菌株均成功擴(kuò)增 Rv0678 基因，其 PCR 產(chǎn)物經(jīng) 2 %瓊膠電泳檢測后于相應(yīng)位置出現(xiàn)目的條帶（圖 2 所示）。

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 劉圖 3 結(jié)核分枝桿菌臨床分離株 Rv2535c 基因全長 PCR 產(chǎn)物凝膠圖注： 0.8%瓊脂糖凝膠 M：2000bp Marker1-5：結(jié)核分枝桿菌臨床分離株2.4.3 PCR 擴(kuò)增結(jié)核分枝桿菌 Rv1979c 基因所得產(chǎn)物凝膠結(jié)果121 例結(jié)核分枝桿菌菌株均成功擴(kuò)增 Rv1979c 基因，，其 PCR 產(chǎn)物經(jīng) 2 %瓊凝膠電泳檢測后于相應(yīng)位置出現(xiàn)目的條帶（圖 4）。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R52

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本文編號：2629311