本文關(guān)鍵詞：液相芯片技術(shù)檢測(cè)耐多藥結(jié)核分枝桿菌方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：結(jié)核分枝桿菌耐藥性的檢測(cè)在預(yù)防和治療結(jié)核病過(guò)程中具有十分重要的意義。從我國(guó)國(guó)情出發(fā),需要建立一種快速有效、成本低廉的耐多藥結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法。本文設(shè)計(jì)了含有耐藥突變基因的質(zhì)粒,模擬耐藥結(jié)核桿菌的不同基因突變類型,將液相芯片技術(shù)與等位基因特異性引物延伸反應(yīng)相結(jié)合,對(duì)耐多藥結(jié)核分枝桿菌的檢測(cè)方法進(jìn)行研究。確定了方法的最佳反應(yīng)體系,可以同時(shí)對(duì)多個(gè)突變基因進(jìn)行檢測(cè),各基因位點(diǎn)之間不存在信號(hào)干擾,最低檢測(cè)濃度可達(dá)1ng/mL;重復(fù)性實(shí)驗(yàn)表明,對(duì)不同基因突變形式檢測(cè)的變異系數(shù)(CV)為6.72%-12.77%。本研究建立的耐多藥結(jié)核桿菌的檢測(cè)方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、檢測(cè)速度快、價(jià)格低廉、高通量等特點(diǎn),極具臨床應(yīng)用潛力。
【關(guān)鍵詞】：液相芯片技術(shù) 等位基因特異性引物延伸反應(yīng) 結(jié)核分枝桿菌 耐多藥性
【學(xué)位授予單位】：長(zhǎng)春理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R52
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-7
• 第一章 緒論7-18
• 1.1 結(jié)核病簡(jiǎn)介7-10
• 1.1.1 結(jié)核病的產(chǎn)生7
• 1.1.2 結(jié)核病的基本現(xiàn)狀7-8
• 1.1.3 耐藥結(jié)核病的分類8
• 1.1.4 結(jié)核病的主治藥物8-9
• 1.1.5 結(jié)核桿菌的耐藥機(jī)理9-10
• 1.2 檢測(cè)結(jié)核病耐藥性的常用方法10-14
• 1.2.1 藥物敏感性試驗(yàn)法10-11
• 1.2.2 直接測(cè)序法11
• 1.2.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)11-12
• 1.2.4 PCR-線性探針雜交技術(shù)12-13
• 1.2.5 固相芯片法13-14
• 1.3 Luminex液相芯片技術(shù)14-16
• 1.3.1 Luminex液相芯片技術(shù)原理14-15
• 1.3.2 Luminex xTAG技術(shù)15-16
• 1.3.3 液相芯片技術(shù)的優(yōu)勢(shì)及其應(yīng)用16
• 1.4 本研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)16-18
• 1.4.1 研究目的和意義16-17
• 1.4.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)17-18
• 第二章 液相芯片技術(shù)檢測(cè)耐多藥結(jié)核分枝桿菌方法建立18-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-19
• 2.1.1 材料18
• 2.1.2 主要儀器18
• 2.1.3 主要試劑18
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)溶液的配制18-19
• 2.2 方法19-27
• 2.2.1 檢測(cè)序列信息19-20
• 2.2.2 感受態(tài)細(xì)胞的制備20-21
• 2.2.3 含有檢測(cè)模板的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化21
• 2.2.4 質(zhì)粒的提取21-22
• 2.2.5 PCR擴(kuò)增反應(yīng)22-23
• 2.2.6 PCR產(chǎn)物純化23
• 2.2.7 ASPE反應(yīng)23-24
• 2.2.8 熒光微球雜交24-25
• 2.2.9 Luminex 200儀器校正25-26
• 2.2.10 樣品檢測(cè)26-27
• 2.2.11 反應(yīng)條件優(yōu)化27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-33
• 2.3.0 質(zhì)粒含量檢測(cè)結(jié)果27-28
• 2.3.1 PCR擴(kuò)增及反應(yīng)體系優(yōu)化結(jié)果28-29
• 2.3.2 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物純化結(jié)果29
• 2.3.3 Tsp DNA聚合酶濃度優(yōu)化結(jié)果29-30
• 2.3.4 熒光微球濃度優(yōu)化結(jié)果30-31
• 2.3.5 鏈霉親和素藻紅蛋白濃度優(yōu)化結(jié)果31-32
• 2.3.6 鏈霉親和素藻紅蛋白雜交時(shí)間優(yōu)化結(jié)果32-33
• 2.3.7 8種重組質(zhì)粒的檢測(cè)結(jié)果33
• 2.4 討論33-35
• 2.5 小結(jié)35-36
• 第三章 液相芯片技術(shù)檢測(cè)耐多藥結(jié)核分枝桿菌可靠性研究36-44
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料36-37
• 3.1.1 材料36
• 3.1.2 主要儀器36
• 3.1.3 主要試劑36
• 3.1.4 實(shí)驗(yàn)溶液的配制36-37
• 3.2 方法37-38
• 3.2.1 靈敏度實(shí)驗(yàn)37
• 3.2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)37-38
• 3.3 結(jié)果38-42
• 3.3.1 靈敏度檢測(cè)38-39
• 3.3.2 重復(fù)性檢測(cè)39-42
• 3.4 討論42-43
• 3.5 小結(jié)43-44
• 結(jié)論44-45
• 致謝45-46
• 參考文獻(xiàn)46-48

  本文關(guān)鍵詞：液相芯片技術(shù)檢測(cè)耐多藥結(jié)核分枝桿菌方法研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：261748