【摘要】：血吸蟲病是一種流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)、危害嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病,但臨床上僅有吡喹酮一種有效的治療藥物,這與繁重的血吸蟲病防治需求不相適應(yīng)。本文前期研究表明白頭翁對(duì)血吸蟲有一定的殺滅作用,但物質(zhì)基礎(chǔ),作用機(jī)制不明,嚴(yán)重限制其作為抗血吸蟲病新藥的開發(fā)和利用。因此本文探索用“組分中藥”理論指導(dǎo)白頭翁皂苷提取物治療血吸蟲病的中藥新藥研究,通過對(duì)白頭翁皂苷抗血吸蟲的構(gòu)效、毒效關(guān)系研究,篩選出抗血吸蟲的物質(zhì)基礎(chǔ)及各組分間的優(yōu)化配比。并通過皂苷的吸收情況及吸收機(jī)理研究,以提高生物利用度為目標(biāo),研制出治療血吸蟲病安全有效的中藥制劑。本文的具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： 1.白頭翁皂苷類成分初步構(gòu)效關(guān)系的研究 在初步總結(jié)皂苷類成分苷元的結(jié)構(gòu)類型、取代基的種類及位置、糖鏈長(zhǎng)度、組成、苷化位置、糖與苷元及糖的連接方式及順序等的基礎(chǔ)上,通過藥物體外抗血吸蟲效應(yīng)及對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞毒性的研究,分析總結(jié)皂苷結(jié)構(gòu)與殺蟲效應(yīng)、細(xì)胞毒性之間的關(guān)系。 結(jié)果顯示,①白頭翁皂苷苷元C-28位的羧基游離對(duì)于皂苷的抗血吸蟲活性至關(guān)重要。②苷元C-3位所連糖鏈的糖基個(gè)數(shù)以及連接順序?qū)υ碥盏目寡x活性有一定的影響。③具有相同糖鏈的皂苷其活性順序?yàn)椋糊R墩果酸苷元常春藤皂苷元。 通過體外篩選出BP-SJ-7、BP-SJ-3、BP-SJ-9、BP-SJ-10四個(gè)皂苷對(duì)血吸蟲有較強(qiáng)的殺滅作用,作用后蟲體腫脹僵硬、體表透明度下降,表皮潰爛,腸腔破損。 經(jīng)等輻射分析法得出,其他成分與BP-SJ-9配合作用后顯示出較強(qiáng)的協(xié)同作用。 2.白頭翁皂苷提取物體內(nèi)外抗血吸蟲作用的研究 在明確提取物物質(zhì)基礎(chǔ)的前提下,以體內(nèi)外殺蟲活性為指標(biāo),篩選不同配比組成的白頭翁皂苷提取物,結(jié)果BTW3提取物與其他提取物相比對(duì)血吸蟲活性有顯著差異。 并通過BTW3提取物體外對(duì)血吸蟲成蟲、童蟲及吡喹酮壓力下的蟲體的作用以及體內(nèi)研究,明確其殺蟲作用及特點(diǎn)。 結(jié)果顯示藥物體內(nèi)外對(duì)血吸蟲的殺滅作用具有濃度依賴性。體外臨界殺蟲濃度分別為：雄性成蟲24μg/mL,雌性成蟲32μg/mL,童蟲32μg/mL,吡喹酮壓力下的蟲體48μg/mL。在40倍鏡下觀察,蟲體明顯收縮、扭曲,體表腫脹,100倍鏡下體表腫脹明顯,組織分布疏松,腸管明顯腫脹彎曲且分布混亂；超微結(jié)構(gòu)顯示皮層褶嵴消失,融合成條索或片塊狀,其上感覺乳突腫大、變形、破潰而丟失,抱雌溝內(nèi)壁體棘、凹陷等基本結(jié)構(gòu)破壞消失,融合皺縮形成條索狀物或模糊一片,乳突腫大、變形、破潰而丟失 體內(nèi)最佳有效殺蟲劑量：成蟲、童蟲均為為400mg/kg。 以400mg/kg口服給藥,對(duì)1、3、7、14、21、28、35天蟲齡的減蟲率達(dá)到65%以上,但對(duì)不同發(fā)育期蟲體的減蟲率沒有顯著性差異。 以400mg/kg口服給藥,藥物對(duì)不同時(shí)間蟲體的體表組織及抱雌溝損傷作用較明顯,第1d觀察發(fā)現(xiàn)：皮層褶嵴消失,融合成條索或片塊狀,其上感覺乳突腫大、變形、破潰而丟失,抱雌溝內(nèi)壁,體棘、凹陷等基本結(jié)構(gòu)破壞消失,融合皺縮形成條索狀物或模糊一片,乳突腫大、變形、破潰而丟失,隨著時(shí)間的延長(zhǎng)(第3d、7d觀察)蟲體體表及抱雌溝變化不明顯。 3.白頭翁皂苷在體腸吸收特性的研究 以白頭翁皂苷抗血吸蟲活性成分為指標(biāo),建立了白頭翁皂苷在體腸吸收模型。通過比較研究2種白頭翁皂苷組成的吸收情況,不同劑量組、不同小腸區(qū)段的的吸收參數(shù),以及P-糖蛋白抑制劑對(duì)其吸收的影響,結(jié)果2種白頭翁皂苷提取物各成分的吸收存在明顯差異,各成分間或提取物中其他成分可能存在促吸收的物質(zhì)；白頭翁皂苷5種抗血吸蟲活性成分吸收情況中等,在各腸段的吸收沒有顯著性差異;白頭翁皂苷B3、B10、B11具有吸收飽和的現(xiàn)象,白頭翁皂苷BD、B7為被動(dòng)擴(kuò)散;加入P-糖蛋白抑制劑維拉帕米及P-糖蛋白底物地高辛后,各成分的吸收速率有顯著提高,預(yù)測(cè)白頭翁皂苷五種主要成分可能是P-糖蛋白底物。 4.白頭翁皂苷提取物制劑的初步篩選 提取物原料的基本物理化學(xué)性決定制劑的劑型設(shè)計(jì),本義對(duì)白頭翁皂苷提取物的理化性質(zhì)進(jìn)行研究,結(jié)果顯示白頭翁皂苷提取物顯弱酸性,在弱堿性環(huán)境中溶解能力最強(qiáng);在各溶媒中各成分溶解能力的大小依次為：B7(?)B3(?)B10(?)B11(?)BD；油水分配系數(shù)很小,親脂性較弱,親水性強(qiáng)；在12h內(nèi)胃酶、胰酶環(huán)境中穩(wěn)定,在高溫、強(qiáng)光照射下穩(wěn)定,吸濕性較強(qiáng)。 根據(jù)腸吸收特性及理化性質(zhì)結(jié)果初步設(shè)計(jì)為環(huán)糊精包含物、乳劑、微粉硅膠吸附劑,以對(duì)童蟲、成蟲的作用為指標(biāo)進(jìn)行篩選,結(jié)果微粉硅膠吸附劑毒性較低,且在300mg/kg口服給藥對(duì)血吸蟲的減蟲率達(dá)到70%左右。 5.白頭翁皂苷微粉硅膠吸附劑的藥效學(xué)研究 對(duì)白頭翁皂苷微硅膠吸附劑進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn),結(jié)果300mg/kg口服給藥對(duì)不同發(fā)育期的血吸蟲體內(nèi)減蟲率達(dá)到65%,但不同發(fā)育期間的減蟲率沒有顯著性差異；不同技術(shù)聯(lián)合使用后對(duì)血吸蟲的減蟲率也沒有顯著提高,說明白頭翁皂苷微粉硅膠吸附劑對(duì)血吸蟲病有一定的治療作用,但仍需進(jìn)一步研究提高其抗血吸蟲藥效。
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【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R532.21

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2323486