【摘要】：乙肝病毒(HBV)為一類嗜肝性病毒,在世界范圍內(nèi)廣泛流行,在中國HBV感染情況更為嚴(yán)重。HBV感染對人類健康具有極大的威脅,也給人類社會造成重大的損失。研究認(rèn)為特異性細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)反應(yīng)在清除HBV感染的過程中發(fā)揮著極其重要的作用。HBV感染后引起的CTL反應(yīng)是一把雙刃劍,既起著病毒清除的作用,但同時又造成了肝損傷。而病毒為了維護(hù)自身的生存會通過產(chǎn)生各種突變體來對抗機(jī)體的清除作用,且HBV突變被證明與乙肝疾病發(fā)展有著一定的關(guān)系。因此,HBV感染中CTL反應(yīng)相關(guān)研究具有重要的理論及實際意義。 目前已報道的CTL表位主要是由西方學(xué)者發(fā)現(xiàn)的,但西方國家與亞洲國家主要流行的HBV基因型并不相同�；谶@個情況,我們選取中國分布最多的B型和C型HBV作為研究對象,并選擇了HBV組成成分中保守性最好且免疫原性最強(qiáng)的核心蛋白(HBc)作為研究目標(biāo)。通過總結(jié)分析NCBI上171條B型HBc序列和159條C型HBc序列,利用overlapping方法合成涵蓋HBcl-150全序列的九肽(每條多肽與相鄰多肽有8個氨基酸的重復(fù)),若某一氨基酸的突變率超過10%,覆蓋該突變氨基酸的一系列多肽也被包括在合成的范圍內(nèi),合計共191條九肽。首先通過T2細(xì)胞結(jié)合實驗,篩選到四條HLA-A2高結(jié)合力的多肽(HBc60-68*,HBc123-131,HBc123-13l*,HBc141-149).隨后通過晶體結(jié)構(gòu)學(xué)研究顯示這四條多肽具有典型的HLA-A*0201表位的結(jié)構(gòu)特點,但同時也具有一些新的特點,從而拓展了人們對MHC-多肽復(fù)合物結(jié)構(gòu)特點上的認(rèn)識。其中HBc第60位突變(L60V)產(chǎn)生的新CTL表位(HBc60-68*,V60),引起我們極大的興趣,并對這一突變位點進(jìn)行了深入的研究。通過晶體學(xué)方法和功能學(xué)實驗相結(jié)合的策略,證明V60具有典型的HLA-A*0201表位多肽的結(jié)構(gòu)特征,在小鼠體中可以產(chǎn)生很強(qiáng)的特異性CTL反應(yīng),而其野生型多肽L60并不可以。通過分析HBV感染患者的臨床資料,觀察到HBc L60V突變與臨床更強(qiáng)的肝損傷,更高病毒水平以及不良預(yù)后相關(guān)。隨后通過在HLA-A2.1/HBV雜交小鼠中進(jìn)行V60多肽免疫,我們證明V60刺激起的多肽特異性CTL反應(yīng)在雜交小鼠中造成了一定的肝損傷。另一方面,我們在野生型HBV質(zhì)粒中引入HBc L60V突變,在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Huh7細(xì)胞后檢測發(fā)現(xiàn),突變型質(zhì)粒的HBV復(fù)制水平明顯高于野生型質(zhì)粒,高壓尾脈注射野生型HBV質(zhì)粒與突變型質(zhì)粒進(jìn)入小鼠體內(nèi)也得到了同樣的實驗結(jié)果。我們進(jìn)一步通過細(xì)胞內(nèi)和原核表達(dá)野生型及突變型HBc蛋白,發(fā)現(xiàn)在同等HBc蛋白表達(dá)量的情況下,突變型HBc蛋白包裝成核心顆粒的水平要明顯高于野生型蛋白,這就說明了HBc L60V突變可能通過促進(jìn)HBc核衣殼的包裝來促進(jìn)HBV復(fù)制,而這個結(jié)果也解釋了含有HBcL60V突變的慢肝病人中HBV DNA水平更高的現(xiàn)象。本實驗中我們展示了一種新型HBV突變行為,該突變以產(chǎn)生一個新HLA-A2限制性CTL表位的代價而促進(jìn)了HBV復(fù)制。我們的實驗結(jié)果表明HBc L60V突變影響了T細(xì)胞反應(yīng),HBV復(fù)制以及藝肝疾病發(fā)展,有助于人們對臨床乙肝疾病發(fā)生機(jī)制的了解。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R512.62

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8 王淑文,劉添發(fā),張希圣;公務(wù)員乙肝病毒感染血清學(xué)研究[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2001年03期

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3 遼寧錦州市傳染病醫(yī)院主任醫(yī)師 王振坤;驅(qū)HBV記[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2011年

4 王丹;我國艾滋病疫苗進(jìn)入Ｉ期臨床[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2004年

5 ;十大成果 2002中國醫(yī)藥科技呈現(xiàn)輝煌[N];科技日報;2002年

6 方彤 陳明蓮;肝炎研究新途徑——基因克隆化[N];健康報;2006年

7 萬同己;乙肝的基因治療[N];中國醫(yī)藥報;2004年

8 吳一福;重組腺病毒核糖核酸酶載體問世[N];中國醫(yī)藥報;2005年

9 本報記者 靖九江;探尋病毒性肝炎的未知世界[N];中國醫(yī)藥報;2002年

10 張曉松;我研制艾滋病疫苗進(jìn)入臨床研究[N];人民日報;2004年

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4 尚小云;基于NY-ESO-1_（157-165）表位的治療性疫苗的分子設(shè)計與免疫學(xué)特性研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 曹永生;Asia1型FMDV復(fù)合表位免疫原的研制及免疫效果研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 孫恩成;西尼羅病毒NS1蛋白對乙型腦炎病毒交叉保護(hù)作用研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

7 李慶虹;基于臨床信息的新發(fā)傳染病診療系統(tǒng)與基于遺傳信息的HBV個體化診療信息系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

8 石英;角蛋白18及其磷酸化在HBV感染慢性肝病及肝細(xì)胞凋亡中的作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

9 南雪平;抗HBV治療對慢性乙型肝炎患者調(diào)節(jié)性免疫功能的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

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本文編號：2302551