本文選題：布魯氏菌 + 蛋白質(zhì)文庫(kù)　； 參考：《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心》2013年碩士論文

【摘要】：布魯氏菌病(Brucellosis,簡(jiǎn)稱(chēng)布病)是嚴(yán)重危害人體健康、畜牧業(yè)發(fā)展及社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的人畜共患性傳染病,由布魯氏菌(Brucella)感染引起。牛、羊等家畜是動(dòng)物及人類(lèi)布病的主要傳染源；傳播途徑主要有消化道、呼吸道及皮膚黏膜等方式；人類(lèi)、家畜等普遍易感。 目前,布病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)仍是細(xì)菌分離培養(yǎng),但分離率低、分離難度大,耗時(shí)長(zhǎng),且存在一定的生物安全問(wèn)題,不適用于快速診斷和大量樣本的處理。因此,國(guó)內(nèi)臨床上采用血清學(xué)檢測(cè)方法虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)和試管凝集試驗(yàn)(SAT)相結(jié)合的方法診斷布病。但RBPT法假陽(yáng)性率高；而SAT法易與其它微生物發(fā)生交叉反應(yīng),操作繁瑣,耗時(shí)長(zhǎng),且無(wú)法區(qū)別SAT陽(yáng)性血清是由疫苗免疫還是自然感染引起。研究發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)與傳統(tǒng)的SAT、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)(CFT)相比,有更高的敏感度和特異度。以光滑型脂多糖(S-LPS)做為抗原的ELISA已發(fā)展為成熟的商品化試劑盒用于牛布病的診斷。但由于S-LPS也可與耶爾森氏菌等發(fā)生交叉反應(yīng),所以本研究試圖選用布魯氏菌中抗原性較強(qiáng)且具有代表性的重組蛋白做為抗原進(jìn)行間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(iELISA),從而建立以重組蛋白做為抗原的iELISA方法,為研制快速診斷布病的iELISA試劑盒奠定基礎(chǔ)。 由于自然患病牛主要感染牛種布魯氏菌,而我國(guó)普遍應(yīng)用于牛的疫苗是羊種(M5)和豬種(S2)布魯氏菌的減毒活疫苗。運(yùn)用蛋白o(hù)mp31存在于除牛種之外的所有布魯氏菌種的特性,建立以omp31為抗原的iELISA方法,可將牛種布魯氏菌與非牛種布魯氏菌區(qū)分開(kāi),進(jìn)而鑒別SAT陽(yáng)性的牛是由自然感染引起還是免疫接種引起。 目前,布魯氏菌的蛋白研究涉及的種類(lèi)較多,研究的角度和側(cè)重點(diǎn)不同,信息較為龐雜。針對(duì)這一現(xiàn)狀,本研究建立了布魯氏菌蛋白質(zhì)文庫(kù),梳理了部分布魯氏菌主要蛋白的研究進(jìn)展,并將其分為外膜蛋白(OMP)、Ⅳ型分泌系統(tǒng)(T4FF)蛋白、胞質(zhì)結(jié)合蛋白和酶類(lèi)及其他,就其免疫原性與抗原性、用于診斷方面的價(jià)值及致病機(jī)理等方面加以綜述。并從蛋白質(zhì)文庫(kù)中選取了研究資料較少且在T4FF中有重要作用的蛋白virB8進(jìn)行了克隆表達(dá),成功純化出重組蛋白virB8,并與本實(shí)驗(yàn)室保存的bp26和omp31兩種蛋白一同進(jìn)行了iELISA方法用于檢測(cè)布病的研究。測(cè)得virB8、bp26及omp31的最佳包被濃度分別為12.90ug/ml,2.60ug/ml,1.24ug/ml;血清最佳稀釋度均為1：100；二抗最佳稀釋度均為1：20000。用70份北京大興區(qū)牛場(chǎng)健康牛血清測(cè)得virB8、bp26及omp31三種抗原的cutoff值分別為：0.199,0.220,0.242。用RBPT與SAT結(jié)合檢測(cè)河南100份牛血清,結(jié)果56份為布病陽(yáng)性,44份陰性。以virB8做抗原檢測(cè)判定為陽(yáng)性的血清為14份,靈敏度為17.9%,特異度為90.9%,對(duì)于布病的檢測(cè)沒(méi)有實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。以bp26做抗原的檢測(cè)中,判定為陽(yáng)性的血清共45份,其靈敏度為75%,特異度為93.2%；符合率為83%,Kappa值為0.664,說(shuō)明兩種檢驗(yàn)方法中高度一致。對(duì)兩種檢測(cè)方法進(jìn)行配對(duì)卡方檢驗(yàn),P值0.05,故認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兩種檢測(cè)方法存在差異,SAT優(yōu)于以bp26做抗原的iELISA方法。以omp31做抗原檢測(cè)判定結(jié)果均為陰性,推定此次采集的河南牛血清中診斷為患病的牛均由自然感染引起。盡管bp26做為抗原的iELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)診斷布病有一定的積極意義,但靈敏度仍不高,下一步將繼續(xù)篩選布氏菌標(biāo)識(shí)抗原,探索多種抗原聯(lián)合診斷布病的iELISA方法。 本研究的結(jié)果為建立更加系統(tǒng)、全面、權(quán)威的布氏菌蛋白質(zhì)文庫(kù)奠定了基礎(chǔ)；對(duì)篩選重組抗原應(yīng)用于iELISA方法檢測(cè)布病具有重要的意義,為研制多種重組抗原聯(lián)合應(yīng)用檢測(cè)布病奠定了基礎(chǔ)；同時(shí)為區(qū)分SAT陽(yáng)性的牛是自然感染還是疫苗免疫提供了切實(shí)可行的方法,對(duì)畜牧業(yè)及經(jīng)濟(jì)的發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。
[Abstract]:Brucism is a zoonotic infectious disease which is seriously harmful to human health , animal husbandry development and socio - economic development , which is caused by infection of brucella . Domestic animals such as cattle and sheep are the main source of infection of animals and human diseases .
The main route of transmission is digestive tract , respiratory tract and mucous membrane of skin and so on .
human , livestock and so on .

At present , the gold standard for the diagnosis of cloth diseases is still bacterial separation and culture , but the separation rate is low , the separation is difficult , the time is long , and there is a certain biological safety problem , which does not apply to the rapid diagnosis and the treatment of a large number of samples .
In this study , it was found that ELISA was used as antigen for diagnosis of cattle disease . However , it was found that ELISA was used as antigen to diagnose bovine bu disease .

Because naturally diseased cattle are mainly infected with cattle , the vaccine of cattle is the attenuated live vaccine of sheep ( M5 ) and porcine race ( S2 ) . By using omp31 as antigen , the iELISA method is established , which can distinguish the bovine and non - bovine brucella , and then discriminate whether the SAT - positive cattle are caused by natural infection or vaccination .

In this paper , we reviewed the research progress of the major protein of brucella , and then divided it into outer membrane protein ( OMP ) , type 鈪，

本文編號(hào)：2097927