本文選題：重組酶聚合酶檢測 + 等溫擴增��； 參考：《解放軍醫(yī)學(xué)雜志》2017年06期

【摘要】：目的建立五種出血熱相關(guān)病毒,即扎伊爾型埃博拉病毒、蘇丹型埃博拉病毒、馬爾堡病毒、拉沙病毒和黃熱病毒的一步法重組酶聚合酶等溫擴增(RPA)技術(shù),為病原體的確定提供現(xiàn)場快速檢測方法。方法通過基因組序列分析,選擇每種病毒的特異核酸片段作為檢測靶基因,針對靶基因序列設(shè)計RPA檢測的引物和探針;取系列稀釋的模板基因進行RPA檢測,確定其靈敏性;取出血熱相關(guān)病毒核酸為模板進行RPA檢測,確定其特異性;驗證不同溫度反應(yīng)條件(37~42℃)對檢測結(jié)果的影響。結(jié)果五種出血熱病毒的RPA反應(yīng)體系均可有效擴增靶基因,靈敏性為1.5×102~1.5×103copies/反應(yīng),與其他出血熱相關(guān)病毒的核酸無交叉反應(yīng);RPA實驗在37~42℃均可實現(xiàn)靶基因的有效擴增。結(jié)論建立了五種出血熱病毒的RPA等溫擴增體系,該體系反應(yīng)快速,溫度范圍寬,適用于現(xiàn)場快速檢測。
[Abstract]:Objective to establish a one step recombinant enzyme polymerase isothermal amplification (RPA) technique for five hemorrhagic fever associated viruses, namely, Zairian Ebola virus, Sudan Ebola virus, Marburg virus, Lassa virus and yellow fever virus. To provide a rapid field detection method for the determination of pathogens. Methods by genomic sequence analysis, specific nucleic acid fragments of each virus were selected as target genes, primers and probes for RPA detection were designed for target gene sequences, and RPA was used to detect a series of diluted template genes to determine their sensitivity. The nucleic acid of haemorrhagic fever associated virus was used as a template for RPA detection to determine its specificity, and to verify the effect of different temperature reaction conditions on the detection results. Results the five RPA reaction systems of hemorrhagic fever virus could amplify the target gene effectively, the sensitivity was 1.5 脳 10 ~ 2 ~ (-1) 脳 103copies/, and the target gene could be amplified effectively without cross-reaction with the nucleic acid of other hemorrhagic fever associated virus. Conclusion five RPA isothermal amplification systems of haemorrhagic fever virus have been established. The system is suitable for rapid detection of hemorrhagic fever virus in the field because of its rapid reaction and wide temperature range.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81501789) 軍隊重大專項課題(AWS15J006) 國家重點實驗室課題(SKLPBS1415)~~
【分類號】：R440;R512.8

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：1935991