丙型肝炎病毒1a、1b和2a型E1E2原核質(zhì)粒的構(gòu)建和序列分析
本文選題:丙型肝炎病毒 + 包膜糖蛋白; 參考:《中國(guó)老年學(xué)雜志》2015年01期
【摘要】:目的構(gòu)建陜西地方株丙型肝炎病毒(HCV)1a、1b和2a型包膜糖蛋白E1E2的原核質(zhì)粒并測(cè)序比對(duì)。方法采用逆轉(zhuǎn)錄-巢式聚合酶鏈反應(yīng)(RT-nest PCR)擴(kuò)增獲得HCV 1a、1b和2a型E1E2片段,與p MD-18 simple vector連接,轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌DH5α,小量提取質(zhì)粒DNA并測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與Gene bank中其他標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)以獲取同源性數(shù)據(jù)。同時(shí)重點(diǎn)分析E2蛋白高變區(qū)(HVR)1和2氨基酸序列。MEGA 4軟件繪制種系進(jìn)化樹(shù)圖。結(jié)果成功擴(kuò)增約2 kb的目的片段并構(gòu)建原核質(zhì)粒,測(cè)序結(jié)果正確。1b亞型E1E2的核苷酸和氨基酸序列的同源性最差。HCV E2的HVR1和2的序列比對(duì)顯示,同種基因亞型在HVR 1的變異性最大,而HVR 2的序列變異性不顯著。不同基因亞型的毒株在HVR 1和2的變異性極大,而1b亞型在HVR 1和2的變異性比1a和2a型突出。結(jié)論陜西地方株HCV 1b型E1E2區(qū)比1a和2a型更易發(fā)生突變,1b型E2的HVR變異性更顯著。
[Abstract]:Objective to construct the primary nuclear particles of hepatitis C virus (HCV) 1a, 1b and 2A envelope glycoprotein E1E2 in Shaanxi, and to obtain HCV 1a, 1b and 2A E1E2 fragments by reverse transcription nested polymerase chain reaction (RT-nest PCR). Sequence. Sequencing results were compared with other standard sequences in Gene bank to obtain homologous data. At the same time, the phylogenetic tree of E2 protein hypervariable region (HVR) 1 and 2 amino acid sequence.MEGA 4 was plotted. The results were successfully amplified about 2 kb target fragments and constructed the original nucleolus, and sequenced the nucleotide and amino acid sequence of the.1b subtype E1E2. The sequence alignment of HVR1 and 2 of the worst homologous.HCV E2 showed that the variation of the homologous gene subtype was the largest in HVR 1, while the sequence variability of HVR 2 was not significant. The variants of the subtypes of the different genotypes were highly variable in HVR 1 and 2, while the 1b subtypes were more prominent in HVR 1 and 2 than in 1a and 2A type. Conclusion the HCV 1b type region of Shaanxi local strain is more than that And type 2A is more prone to mutation, and HVR variability of type 1b E2 is more significant.
【作者單位】: 陜西中醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)系免疫及檢驗(yàn)教研室;陜西綏德名州鎮(zhèn)衛(wèi)生院;
【基金】:陜西科學(xué)技術(shù)廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目資助(No.SJ08C232)
【分類號(hào)】:R512.63
【參考文獻(xiàn)】
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【共引文獻(xiàn)】
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本文編號(hào):1796803
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