發(fā)布時間：2018-04-18 06:47

  本文選題：人乳頭瘤病毒 + 滅活仙臺病毒��； 參考：《揚州大學》2017年碩士論文

【摘要】：人乳頭瘤病毒(Human Papilloma Virus,HPV)在人群中廣泛傳播,感染人體皮膚和粘膜引起良性或惡性病變。研究發(fā)現(xiàn)尋常疣、尖銳濕疣、宮頸癌、皮膚癌、陰道癌、陰莖癌、肛門癌、乳腺癌等均與HPV感染相關,其中95%的宮頸癌由高危型人乳頭瘤病毒感染引起。HPV感染分布存在年齡與地區(qū)差異性,不同年齡段、不同地區(qū)HPV的感染率和亞型分布不同。我們通過分析揚州地區(qū)10473例婦女HPV感染情況,對本地區(qū)婦女HPV感染情況進行初步了解,為當?shù)豀PV感染性疾病的防治提供依據,同時探討日本血凝病毒囊膜(Hemagglutinating virus of Japan envelope,HVJ-E)誘導 HPV18 陽性的 Hela 細胞凋亡的作用機制,為腫瘤治療提供新的手段。一、HPV感染情況分析目的:了解揚州地區(qū)婦女人群中人乳頭瘤病毒感染情況,為當?shù)豀PV感染性疾病的防治提供依據。方法:收集2015年10月--2016年10月在蘇北人民醫(yī)院皮膚科和婦科門診就診的18-86歲10473例女性患者宮頸脫落上皮細胞,采用PCR-反向點雜交法檢測HPV 21種基因亞型。按患者年齡劃分為≤29歲,30-39歲,40-49歲,50-59歲,≥60歲五個年齡組,分析HPV各亞型分布特點,卡方檢驗比較各年齡組感染率。結果:10473例女性患者,感染HPV 2577例,感染率為24.61%,單一感染1819例,多重感染758例,感染率分別為17.37%,7.24%;≤29歲,30-39歲,40-49歲,50-59歲,≥60歲五個年齡組HPV感染率和HPV感染陽性百分比分別為23.88%,23.36%,23.77%,28.25%,32.27%和 17.66%,27.40%,34.65%,14.82%,5.47%;Hr-HPV 感染檢出率為28.40%,其中Hr-HPV-16,52,58,53,39,51檢出數(shù)位居前六,檢出率依次為4.54%,4.33%,3.64%,2.96%,2.17%,1.96%,Hr-HPV-18 檢出率較低,僅為 1.46%;Lr-HPV 感染檢出率為5.99%,其中Lr-HPV-81,11,6,44檢出數(shù)位居前四,檢出率依次為3.16%,0.93%,0.91%,0.72%。結論:揚州地區(qū)HPV感染分布具有年齡差異性及區(qū)域性;感染的高峰人群集中在30-49歲,常見高危及低危亞型分別為Hr-HPV-16,52,58,53,39,51和Lr-HPV-81,11,6,44。在揚州地區(qū)開展HPV 21種基因亞型檢測對揚州地區(qū)HPV感染性疾病的防治具有指導意義。二、HVJ-E誘導Hela細胞凋亡機制的研究目的:選取HPV18陽性的Hela細胞為研究對象,探討HVJ-E誘導Hela細胞凋亡的作用機制。方法:取不同濃度的HVJ-E病毒粒子接種Hela細胞,倒置顯微鏡觀察Hela細胞形態(tài)變化,CCK-8法檢測細胞活力,FACS法檢測細胞凋亡率,western blot法檢測p53、Bcl-2/Bax、Caspase信號通路、MAPK信號通路蛋白表達情況。為進一步證實Caspase信號通路、MAPK信號通路在HVJ-E誘導Hela細胞凋亡中的作用,用Caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK(50μM),ERK1/2 抑制劑 U0126(18μM),JNK 抑制劑 SP600125(5產M),p38 抑制劑SB203580(12.5產M)分別預處理 Hela 細胞 20min,2h,40min,2h,加入 HVJ-E(800MOI)病毒粒子,CCK-8法檢測各組細胞活力,FACS法檢測各組細胞凋亡率,western blot法檢測Caspase-3、PARP、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白表達情況。結果:HVJ-E作用于Hela細胞,引起細胞生長停滯、皺縮及破裂;隨著HVJ-E病毒粒子濃度增加,Hela細胞活力逐漸降低,凋亡率逐漸增加,p53、Caspase-9、Caspase-3、PARP蛋白表達逐漸增強,Bcl-2抗凋亡蛋白表達逐漸減弱,Bax促凋亡蛋白無明顯變化,Bcl-2與Bax比值隨病毒濃度增加而降低;在MAPK通路中,ERK1/2、JNK和p38磷酸化蛋白的表達量與病毒濃度呈劑量效應關系。抑制劑處理Hela細胞后可下調HVJ-E誘導的細胞凋亡,減少HVJ-E導致的細胞死亡,同時抑制Caspase-3、PARP、p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白表達。結論:HVJ-E能抑制Hela細胞增殖,誘導其發(fā)生凋亡;p53、Bcl-2/Bax、Caspase信號通路和MAPK信號通路在HVJ-E誘導Hela細胞凋亡中發(fā)揮重要作用。
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【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R511

【參考文獻】

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本文編號：1767242