本文選題：乙型肝炎病毒　切入點：核心蛋白　出處：《重慶醫(yī)科大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的探討基于乙肝病毒核心蛋白（HBc）的改造位點及形式，使形成攜帶細胞穿膜肽或配體的核心顆粒，以作為HBV感染模型改造的基礎。 方法 1用不依賴酶切連接的分子克隆方法（RLIC）構建HBc、HBV1.1c-及各種HBc改造質粒。 2將各種HBc重組體與HBV1.1c-共轉染HEK293細胞，通過提取細胞內(nèi)核心顆粒DNA，Southern blot檢測DNA中間體，來判斷相應基因工程改造HBc是否支持HBV復制，形成包裹核酸的核心顆粒。 結果 1成功構建在HEK293細胞內(nèi)有效支持HBV復制的WtHBc與HBV1.1c-反式互補系統(tǒng)； 2HBc部位aa79-80缺失支持HBV制； 3HBc aa86-93缺失后功能缺； 4HBc N末插入肽后能較水平支持HBV制； 5HBc N末可為普有效位點，用A/B/C接連接，可支持片EGFP（238aa）RFP（225aa）、VSVG（511aa）。 結論我們構建了有效HBc與HBV1.1c-反式互補統(tǒng)，統(tǒng)可檢造HBc是否具有包裹核酸形成核心顆粒類病毒（VLPs）的功能。利用該系統(tǒng)，我們檢測到HBc aa79-80及aa86-93缺失或替換后均存在功能缺陷，，這些序列可能與HBc的完整結構及功能有關。N末端可作為有效的改造位點，支持各種長度的外源蛋白融合，可長達511aa。
[Abstract]:Objective to investigate the modification site and form of HBc-based HBV core protein in order to form the core particles carrying cellular membrane penetrating peptide or ligand, which can be used as the basis for the modification of HBV infection model. Method. 1.1c- and all kinds of HBc modified plasmids were constructed by ligation-independent molecular cloning method (RLIC-). 2Cotransfection of various HBc recombined with HBV 1.1 c- into HEK293 cells. The nucleic acid nucleic acid core particles were extracted from the cells and detected by Southern blot to determine whether the HBc could support HBV replication and form nucleic acid nucleic acid core particles. Results. 1A WtHBc / HBV 1.1 c- trans complementary system was successfully constructed in HEK293 cells to effectively support HBV replication. 2HBC site aa79-80 deletion supported HBV system; 3functional deficiency after HBc aa86-93 deletion; 4HBc N terminal insertion peptide can support HBV system at a higher level; 5HBc N can be a common effective site, which can be connected with A / B / C, and can support EGFP238aa RFPN225aa / VSVG 511aAU. Conclusion We have constructed an effective HBc and HBV 1.1 c- trans complementary system, which can be used to detect whether HBc has the function of nucleic acid forming core granulovirus-like virus (HBc). Using this system, we can detect the functional defects of HBc aa79-80 and aa86-93 after deletion or replacement. These sequences may be related to the complete structure and function of HBc. The N terminal can be used as an effective modification site to support fusion of foreign proteins of various lengths and can be as long as 511aa.
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62

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本文編號：1631360