發(fā)布時間：2018-03-18 08:20

  本文選題：乙肝病毒　切入點(diǎn)：肝癌　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）慢性感染是我國重大的公共衛(wèi)生問題，流行病學(xué)調(diào)查顯示大陸地區(qū)至少有8億人感染過乙肝病毒，乙肝表面抗原攜帶率高達(dá)10.34%，占全球慢性感染人數(shù)的1/3。乙肝病毒慢性感染可導(dǎo)致肝硬化（livercirrhosis, LC）、肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）等嚴(yán)重的終末期肝臟疾病。HBV核心啟動子區(qū)（EnhancerII/BCP/PC）及前S區(qū)（preS）的病毒突變、基因型C、高病毒復(fù)制水平、e抗原陽性等病毒特征被證明可顯著增加肝癌的發(fā)病風(fēng)險。目前乙肝病毒致癌的機(jī)制尚未完全明了，有報道認(rèn)為病毒在宿主基因組上的整合可增加染色體不穩(wěn)定性，是病毒致癌的重要機(jī)制之一。肝癌的發(fā)生是環(huán)境因素和遺傳因素共同作用的結(jié)果。單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism, SNP）是人體重要的遺傳標(biāo)志，在基因組內(nèi)廣泛分布，可影響人群對疾病的易感性。NF-κB是引起炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)超過200個基因的表達(dá)，包括各種細(xì)胞因子、趨化因子及黏附分子等，在機(jī)體抵御外界因素侵犯及炎癥-癌癥轉(zhuǎn)換中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。因此研究NF-κB信號通路的遺傳多態(tài)性和乙肝病毒因素在乙肝相關(guān)肝病中的作用對明確乙肝病毒致病機(jī)制具有重大的意義。 目的：分析NF-κB SNP（rs696, rs2233406, rs3138053, rs28362491）與乙肝病毒慢性感染、病毒清除、乙肝后肝硬化及肝癌發(fā)生風(fēng)險的相關(guān)性，并分析這些SNP位點(diǎn)和乙肝病毒突變頻率的關(guān)系及兩者在乙肝后肝硬化、肝癌發(fā)生中的交互作用。分析乙肝病毒整合在復(fù)發(fā)性HCC病人及長期未復(fù)發(fā)HCC病人中的特點(diǎn)，找到和肝癌發(fā)生及復(fù)發(fā)相關(guān)的高頻整合位點(diǎn)。 方法：采用熒光探針-實時定量PCR法對1342例健康對照、327例乙肝病毒自然清除者、316例無癥狀攜帶者、866例慢乙肝患者、482例肝硬化患者以及1182例乙肝后肝癌患者進(jìn)行SNP分型，用型特異性引物多重PCR法對HBV基因型進(jìn)行鑒定，用巢式PCR法對HBV基因組的EnhII/BCP/PC和preS區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，測序后使用MEGA5.0進(jìn)行序列比對鑒定病毒突變。采用非條件logistic回歸法分析SNP與病毒突變在終末期肝病中的相乘性交互作用。采用HBV捕獲測序檢測36例復(fù)發(fā)性HCC病人及14例長期未復(fù)發(fā)HCC病人的配對癌及癌旁組織中的病毒整合情況，用student’s t檢驗或卡方檢驗比較整合事件和臨床資料的關(guān)聯(lián)，并用生物信息學(xué)分析對整合基因進(jìn)行注釋，找到高頻整合位點(diǎn)。結(jié)果： 1、NF-κB SNP與乙肝相關(guān)肝病的關(guān)系 （1）NF-κB SNP和乙肝病毒慢性感染及病毒清除的關(guān)系 在校正了年齡和性別因素后，rs28362491del/del基因型相對于ins/ins基因型來說顯著降低了健康人群患基因型B乙肝病毒慢性感染的風(fēng)險（AOR=0.58，95%CI=0.37-0.91，P=0.019）。當(dāng)乙肝病毒自然清除者作為對照時，rs2233406的CT基因型、rs3138053的AG基因型及顯性模型（AG+GG）顯著降低了基因型B乙肝病毒慢性感染的風(fēng)險（rs2233406CT：AOR=0.63，95%CI=0.39-0.99，P=0.047；rs3138053AG：AOR=0.56，95%CI=0.35-0.90，P=0.016；rs3138053AG+GG：AOR=0.54，95%CI=0.34-0.86，P=0.010）。同時，rs3138053的顯性模型還可顯著降低基因型C乙肝病毒慢性感染的風(fēng)險（AOR=0.71，95%CI=0.50-1.00，P=0.048）。rs696未表現(xiàn)出和乙肝病毒慢性感染或清除的相關(guān)性。 （2）NF-κB SNP和終末期肝病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系 在分析NF-κB SNP和肝硬化及肝癌發(fā)生相關(guān)性時，我們發(fā)現(xiàn)這4個位點(diǎn)和肝硬化的發(fā)生均無顯著相關(guān)性。而在基因型C HBV分層人群中，發(fā)現(xiàn)在校正年齡和性別后，rs2233406的CT基因型及顯性模型（CT+TT）不僅顯著增加健康人群發(fā)生乙肝后肝癌的風(fēng)險（CT：AOR=1.35，95%CI=1.06-1.71，P=0.014； CT+TT：AOR=1.31，95%CI=1.04-1.65，P=0.021），CT基因型還可顯著增加慢乙肝患者進(jìn)展為肝癌的風(fēng)險（AOR=1.33，95%CI=1.01-1.75，P=0.043）。其他3個位點(diǎn)和肝癌的發(fā)生無相關(guān)。 2、NF-κB SNP和HBV突變的關(guān)系及兩者在肝癌中的交互作用 （1）NF-κB SNP和HBV突變的關(guān)系 在基因型C感染者中，多因素分析顯示在校正了年齡和性別后，rs2233406的突變基因型可顯著增加T1753V,A1762T/G1764A, G1719T, preS deletion, preS1startcodon mutation（均為肝癌危險性突變）的頻率。rs28362491的突變基因型在C型感染者中可顯著增加A1762T/G1764A（肝癌危險性突變）的頻率，同時降低preS2startcodon mutation（肝癌危險性突變）的頻率。在基因型B感染者中，rs28362491的del/del基因型可顯著增加G1899A（肝癌危險性突變）的頻率。rs696及rs3138053兩個SNP位點(diǎn)在基因型B和C感染者中均未顯示出和病毒突變頻率有關(guān)聯(lián)。 （2）NF-κB SNP和HBV突變在乙肝后肝癌發(fā)生中的交互作用 在基因型C感染者中，經(jīng)過年齡和性別的校正，rs2233406的顯性模型（CT+TT）和A1762T/G1764A在慢乙肝進(jìn)展為肝癌的過程中存在顯著的協(xié)同性交互作用（AOR=2.61，95%CI=1.09-6.26，P=0.032），兩者共同促進(jìn)肝癌的發(fā)生。同時，rs2233406的顯性模型（CT+TT）還和preS2start codon mutation在基因型C肝癌的發(fā)生中存在顯著的拮抗性交互作用（AOR=0.42，95%CI=0.19-0.93，，P=0.032），降低了肝癌的發(fā)生風(fēng)險。 3、病毒整合率及整合數(shù)與臨床資料的關(guān)聯(lián) 乙肝后肝癌病人癌組織中病毒整合率為80%，顯著高于癌旁組織中病毒的整合率44%（P0.001），而復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)HCC病人相比病毒整合率無顯著差異。復(fù)發(fā)性HCC病人癌組織中病毒的平均整合數(shù)為2.78個，顯著高于未復(fù)發(fā)HCC病人癌組織中的平均整合數(shù)1.21個（P=0.002）。晚期復(fù)發(fā)HCC病人癌組織中的平均整合數(shù)為2.6個，顯著高于癌旁組織中的平均整合數(shù)0.53個（P=0.002），而早期復(fù)發(fā)和長期未復(fù)發(fā)組癌和癌旁中的平均整合數(shù)無顯著差異。病毒整合數(shù)還和HCC病人性別顯著相關(guān)，男性癌組織中的平均整合數(shù)為2.59個，顯著高于女性癌組織中的平均整合數(shù)0.50個（P=0.028）。 4、整合位點(diǎn)在人和病毒基因組上的分布 HBV在癌組織中的整合更趨向于啟動子區(qū)和外顯子區(qū)等功能區(qū)域，而在癌旁組織中則大都分布于內(nèi)含子或基因間區(qū)。5號染色體是復(fù)發(fā)性癌組織整合的高頻位點(diǎn)，而2號染色體是所有癌旁組織的高頻整合位點(diǎn)，14、17、18及Y染色體上的整合僅見于癌組織而未見于癌旁組織。在復(fù)發(fā)和未復(fù)發(fā)HCC病人的癌或者癌旁組織中，HBV整合位點(diǎn)均集中于1600-1900bp之間。 5、整合基因的功能注釋及高頻整合位點(diǎn) 病毒整合的基因間存在相互作用的復(fù)雜關(guān)系，癌旁組織中的整合基因大多與調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄有關(guān)，未復(fù)發(fā)癌組織中的整合基因與端粒酶的活性相關(guān)，而復(fù)發(fā)性癌組織中的整合基因主要參與細(xì)胞凋亡和染色質(zhì)重塑。除TERT、FN1及MLL4基因外，發(fā)現(xiàn)了8個新的HBV高頻整合位點(diǎn)。 結(jié)論： 1、 rs28362491del/del基因型可降低健康人群患基因型B HBV慢性感染的風(fēng)險；rs3138053的G等位基因可同時增加基因型B和C HBV的清除；rs2233406的CT基因型可增加基因型B HBV的清除，同時增加健康人及慢乙肝患者發(fā)生基因型C肝癌的風(fēng)險。 2、 NF-κB SNP可影響HBV突變頻率，兩者在肝癌的發(fā)生中存在復(fù)雜的交互作用。 3、相對于癌旁組織，HBV在HCC癌組織中的整合更為常見；病毒整合在肝癌復(fù)發(fā)的過程中得到了富集，且癌旁組織中的整合數(shù)越高，肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)越早。 4、HBV在HCC癌和癌旁組織中的整合模式不同，在癌組織中的整合可能和肝癌發(fā)生的關(guān)系更加密切。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Clinical relevance and public health significance of hepatitis B virus genomic variations[J];World Journal of Gastroenterology;2009年46期

2 蔣素貞;楊紫偉;李韋杰;李曉君;陳香梅;魯鳳民;;原發(fā)性肝細(xì)胞癌中HBV DNA整合位點(diǎn)分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2011年01期

本文編號：1628753