本文選題：RNA-Seq　切入點：氟康唑　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)(RNA-Seq技術(shù))分析生物膜態(tài)白念珠菌不同處理組間轉(zhuǎn)錄譜的表達差異,尋找與白念珠菌生物膜形成、耐藥等相關(guān)的功能基因。方法構(gòu)建白念珠菌標準菌株的生物膜模型,將其分為生物膜態(tài)無處理組與氟康唑、環(huán)孢菌素A聯(lián)合用藥兩個處理組,利用高通量RNA-Seq技術(shù)分析聯(lián)合用藥對轉(zhuǎn)錄組產(chǎn)生的影響,分析差異表達基因與生物膜形成、耐藥等的相互關(guān)系,并對臨床篩選的白念珠菌進行目的基因驗證。結(jié)果通過產(chǎn)膜能力與藥物敏感性試驗篩選出8株與白念珠菌標準菌株產(chǎn)膜與藥敏結(jié)果相同的臨床分離菌株。測序分析顯示差異表達基因共有522個,其中上調(diào)的差異基因有253個,下調(diào)的差異基因有269個。根據(jù)GO功能分類結(jié)果顯示,這些基因主要涉及細胞壁、漿膜的合成,外排轉(zhuǎn)運,免疫反應(yīng),菌相轉(zhuǎn)換等功能;KEGG分析表明這些差異表達基因參與糖酵解,脂肪酸代謝,細胞因子受體相互作用,細胞分裂等信號通路。通過分析篩選出9個目的基因,利用臨床分離株白念珠菌對目的基因驗證,這些目的基因變化均與轉(zhuǎn)錄組結(jié)果一致。其中,als3,cdr1,cln1,cln2,rfg1,erg3,ddc1基因表達量呈不同程度的升高或降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);cpp1,efg1呈升高與降低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論利用RNA-Seq技術(shù)初步分析得到與白念珠菌生物膜形成與耐藥相關(guān)的幾個基因,發(fā)現(xiàn)氟康唑與環(huán)孢菌素A聯(lián)合用藥抑制生物膜是一個多基因參與、多個生物過程協(xié)同調(diào)控的過程,從而為研發(fā)新型抗真菌藥物提供了新的靶點,為臨床合理使用抗生素藥提供了依據(jù)。
[Abstract]:Objective to analyze the differences of transcriptional profiles of Candida albicans treated with biofilm by transcriptome sequencing technique (RNA-Seq), and to find out the formation of biofilm with Candida albicans. Methods the biofilm model of Candida albicans standard strain was established and divided into two groups: no treatment group, fluconazole group and cyclosporin A group. High-throughput RNA-Seq technique was used to analyze the effect of combined drug use on transcriptome, and the relationship between differentially expressed genes and biofilm formation, drug resistance, etc. Results eight clinical isolates of Candida albicans with the same results of membrane production and drug sensitivity were screened by membrane production and drug sensitivity tests. Sequencing results showed that the results were similar to those of Candida albicans. There were 522 differentially expressed genes. According to go functional classification, these genes are mainly involved in cell wall, serous membrane synthesis, efflux transport, immune response. KEGG analysis showed that these differentially expressed genes were involved in glycolysis, fatty acid metabolism, cytokine receptor interaction and cell division. The target genes were verified by clinical isolates of Candida albicans, and the changes of these target genes were consistent with the results of transcriptome, among which the expression of cdr1 / cdr1 / cln2rfg1 / rfg1 / erg3ddc1 gene increased or decreased in varying degrees, and the difference was statistically significant (P 0.05cpp1efg1). Conclusion several genes related to biofilm formation and drug resistance of Candida albicans were preliminarily analyzed by RNA-Seq technique. It was found that fluconazole combined with cyclosporin A was a polygene involved in the inhibition of biofilm. Multiple biological processes are coordinated to regulate the process, which provides a new target for the development of new antifungal drugs, and provides a basis for the rational use of antibiotics in clinical practice.
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院;寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗中心;
【基金】：寧夏臨床病原微生物重點實驗室開放課題(No.LCPM201502-I) 寧夏臨床病原菌菌種資源的保護和利用研究(No.LCPM201501-I)
【分類號】：R519.3

【參考文獻】

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本文編號：1597771