本文關(guān)鍵詞： 發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒 新型布尼亞病毒 非結(jié)構(gòu)蛋白 包涵體 免疫逃逸 病毒復(fù)制工廠　出處：《南京大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus, SFTSV)是近年由我國(guó)科學(xué)家分離發(fā)現(xiàn)的一株新病毒,屬于布尼亞病毒科白蛉病毒屬。SFTSV感染人體可引起一類急性傳染性疾病,患者表現(xiàn)為發(fā)熱伴血小板和白細(xì)胞減少,重癥病例出現(xiàn)多臟器衰竭,臨床稱之為發(fā)熱伴血小板減少綜合征(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome, SFTS),其病死率約10%,對(duì)公共健康安全構(gòu)成重要威脅。然而,目前對(duì)SFTSV致病機(jī)制的認(rèn)識(shí)仍屬空白,亟需研究闡明。既往有關(guān)布尼亞病毒的研究發(fā)現(xiàn),病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSs (nonstructural S segment, NSs)可抑制宿主細(xì)胞IFN-β天然抗病毒反應(yīng),是病毒的重要毒力因子。有關(guān)SFTSV非結(jié)構(gòu)蛋白的前期研究也證實(shí),NSs蛋白具有抑制IRF3啟動(dòng)子活性和NF-κB信號(hào)通路活性的功能,但具體機(jī)制尚未明確。據(jù)此,本研究旨在探討SFTSV非結(jié)構(gòu)蛋白NSs調(diào)控宿主細(xì)胞天然免疫反應(yīng)的具體機(jī)制以及是否具有其他生物學(xué)功能。 我們發(fā)現(xiàn)：SFTSV非結(jié)構(gòu)蛋白NSs可在轉(zhuǎn)染細(xì)胞及感染細(xì)胞內(nèi)形成包涵體結(jié)構(gòu)(Inclusion bodies, IBs),隨著轉(zhuǎn)染或感染時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞內(nèi)IBs結(jié)構(gòu)數(shù)量逐漸減少,IBs結(jié)構(gòu)直徑逐漸變大；同時(shí),NSs蛋白可與宿主細(xì)胞IFNs反應(yīng)通路中重要蛋白激酶TBK1相互作用,并將TBK1捕獲進(jìn)IBs結(jié)構(gòu),而且NSs可間接與IKK復(fù)合物的另兩個(gè)蛋白分子IKKε和IRF3發(fā)生相互作用,并同樣將其捕獲進(jìn)IBs結(jié)構(gòu)；另外,NSs蛋白可以將流感病毒感染激活的磷酸化IRF3(p-IRF3)捕獲到IBs結(jié)構(gòu)內(nèi),阻礙p-IRF3入核調(diào)控IFNs基因轉(zhuǎn)錄,從而在IFNs反應(yīng)的下游通路阻斷宿主細(xì)胞的天然免疫反應(yīng)。我們還發(fā)現(xiàn)：NSs蛋白可以與自身相互作用,這可能是NSs蛋白形成IBs結(jié)構(gòu)的重要生物學(xué)基礎(chǔ)：NSs蛋白可以與病毒核蛋白NP以及病毒RNA具有相互作用；HeLa細(xì)胞內(nèi)外源性表達(dá)NSs蛋白,可促進(jìn)病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖；利用親脂性染料Nile Red,觀察到細(xì)胞內(nèi)脂滴小體與NSs蛋白形成的IBs結(jié)構(gòu)存在空間共定位；利用脂質(zhì)代謝抑制劑抑制細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)合成,可以降低SFTSV感染細(xì)胞內(nèi)IBs數(shù)量,降低細(xì)胞內(nèi)病毒M和S基因水平；同時(shí),病毒RNA復(fù)制的中間體dsRNA與NSs蛋白形成的IBs結(jié)構(gòu)也存在空間共定位,從而提示細(xì)胞脂質(zhì)代謝與SFTSV增殖有關(guān),而且NSs可能作為腳手架蛋白,其形成的包涵體結(jié)構(gòu)可能作為病毒復(fù)制工廠為病毒的復(fù)制提供場(chǎng)所。 本研究揭示了病毒實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的一種新機(jī)制,即病毒利用NSs蛋白形成的包涵體結(jié)構(gòu)雪藏宿主細(xì)胞內(nèi)IFNs反應(yīng)通路中3個(gè)重要蛋白分子TBK1、IKKε和IRF3,直接導(dǎo)致p-IRF3不能入核,阻礙IFNs的產(chǎn)生,實(shí)現(xiàn)病毒的免疫逃逸。本研究還證實(shí),SFTSV增殖與細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝有關(guān),且提示NSs蛋白形成的包涵體結(jié)構(gòu)可能作為病毒的復(fù)制工廠,參與病毒的增殖過(guò)程。本研究首次在分子水平探討SFTSV的非結(jié)構(gòu)蛋白NSs調(diào)控宿主天然免疫及促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)增殖的機(jī)制,填補(bǔ)了我們對(duì)SFTSV致病機(jī)制理解認(rèn)識(shí)的空白,為臨床設(shè)計(jì)新型抗病毒藥物提供了新思路。
[Abstract]:Fever with thrombocytopenia syndrome virus ( SFTSVs ) is a new virus isolated and discovered by scientists in China in recent years . It is a kind of acute infectious disease . It is characterized by fever with thrombocytopenia and white blood cells . It is an important virulence factor for virus . However , the previous research on the non - structural protein of SFTSV has shown that the NSs protein has the function of inhibiting the activity of the IRF3 promoter and NF - 魏B signaling pathway , but the specific mechanism is not clear . According to this , the aim of this study is to investigate the specific mechanism of SFTSV non - structural protein NSs in regulating the innate immune response of host cells and whether it has other biological functions . We have found that the NSs protein can interact with other two protein molecules IKK蔚 and IRF3 of the host cell IFNs . The NSs protein can interact with the other two protein molecules IKK蔚 and IRF3 of the host cell IFNs . This study has disclosed a new mechanism for the immune escape of the virus , that is , the inclusion body structure formed by the NSs protein has three important protein molecules TBK1 , IKK蔚 and IRF3 , which directly leads to the inability of the p - IRF3 to enter the nucleus and prevent the immune escape of the virus . The study also proves that the inclusion body structure formed by the NSs protein can be used as the replication factory of the virus to participate in the proliferation process of the virus .

【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R510

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1482289